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[求助]
PCR到qPCR的問題 已有1人參與
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土壤DNA提取完后進行了普通PCR和凝膠成像，下一步想做qPCR，請問中間還要有哪些過渡實驗嗎？比如PCR產(chǎn)物純化，目的基因克隆，質(zhì)粒提取，測序等，是必須要做的嗎？能不能用提取的DNA直接做qPCR？新手求指教？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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要看想要的結(jié)果是什么，直接做，設(shè)置內(nèi)參做相對定量。還是構(gòu)建標曲做絕對定量。土壤DNA大多含有雜質(zhì)，視提取結(jié)果看是否純化。余下都是常規(guī)操作，一搜一大把操作路線。但首先要明白，自己想要的結(jié)果是什么 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
3樓2018-10-16 09:11:00
lansong9783
金蟲 (小有名氣)
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2樓2018-10-16 04:35:42
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片段是在160到210bp之間的，應該符合要求。但是普通PCR凝膠成像顯示出條帶后，不是還要進行測序才能進一步確定目的基因嗎？測序的話就要進行質(zhì)粒提取，不還是要進行中間的那幾步嗎？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2018-10-16 23:06:08
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想要得到的結(jié)果是得出目的基因的相對豐度，我看有些文章說是用相對定量，但是也提取質(zhì)粒做了標準曲線�；蛳鄬ωS度是樣本中目的基因的決對拷貝數(shù)/內(nèi)參基因16S-rRNA絕對拷貝數(shù)，這是相對定量嗎？是不是文章中寫錯了嗎？？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2018-10-16 23:34:50
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