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futaylor新蟲 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于土壤酶活測(cè)定的問題
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最近測(cè)土壤脲酶活性，用的方法如下： 稱取5g土樣于50ml三角瓶中，加1ml甲苯，振蕩均勻，15min后加10ml10%尿素溶液和20ml PH 6.7檸檬酸鹽緩沖溶液，搖勻后在37℃恒溫箱培養(yǎng)24小時(shí)。培養(yǎng)結(jié)束后過(guò)濾，過(guò)濾后取1ml濾液加入50ml容量瓶中，再加4ml苯酚鈉溶液和3ml次氯酸鈉溶液，隨加隨搖勻。20min后顯色，定容。1h內(nèi)在分光光度計(jì)與578nm波長(zhǎng)處比色。（靛酚的藍(lán)色在1h內(nèi)保持穩(wěn)定）。 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：在測(cè)定樣品吸光值之前，分別取0、1、3、5、7、9、11、13ml氮工作液，移于50ml容量瓶中，然后補(bǔ)加蒸餾水至20ml。再加入4ml苯酚鈉溶液和3ml次氯酸鈉溶液，隨加隨搖勻。20min后顯色，定容。1h內(nèi)在分光光度計(jì)上于578nm波長(zhǎng)處比色。然后以氮工作液濃度為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 注意事項(xiàng): 1、每一個(gè)樣品應(yīng)該做一個(gè)無(wú)基質(zhì)對(duì)照，以等體積的蒸餾水代替基質(zhì)，其他操作與樣品實(shí)驗(yàn)相同，以排除土樣中原有的氨對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。 2、整個(gè)實(shí)驗(yàn)設(shè)置一個(gè)無(wú)土對(duì)照，不加土樣，其他操作與樣品實(shí)驗(yàn)相同，以檢驗(yàn)試劑純度和基質(zhì)自身分解。 3、如果樣品吸光值超過(guò)標(biāo)曲的最大值，則應(yīng)該增加分取倍數(shù)或減少培養(yǎng)的土樣 四、結(jié)果計(jì)算： 以24小時(shí)后1g土壤中NH3－N的毫克數(shù)表示土壤脲酶活性（Ure）。 Ure=（a樣品－a無(wú)土－a無(wú)基質(zhì)）×V×n／m 式中：a樣品為樣品吸光值由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的NH3－N毫克數(shù)； a無(wú)土為無(wú)土對(duì)照吸光值由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的NH3－N毫克數(shù)； a無(wú)基質(zhì)為無(wú)基質(zhì)對(duì)照吸光值由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的NH3－N毫克數(shù)； V為顯色液體積；n為分取倍數(shù)，浸出液體積／吸取濾液體積；m表示烘干土重 在最后的計(jì)算時(shí)，請(qǐng)問顯色液的體積是多少？浸出液體積和吸取濾液體積又分別是多少呢？ |
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chen_sm
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