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請(qǐng)教釀酒酵母出孢子試驗(yàn)及酵母顯微操作儀 已有1人參與
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各位前輩，我有些問(wèn)題想請(qǐng)教。 我從酵母突變體庫(kù)購(gòu)買的二倍體釀酒酵母，所關(guān)心的基因位點(diǎn)是雜合的，是使用kanMX4編碼片段進(jìn)行的同源重組，帶G418的抗性，菌株親本是BY4743。 我想用帶有我目的基因的質(zhì)粒（URA篩選標(biāo)記），先轉(zhuǎn)進(jìn)這個(gè)雜合體中，再通過(guò)誘導(dǎo)酵母產(chǎn)生四分體小孢子的方法，在G418 / -ura 的雙篩選平板上將既是knockout又轉(zhuǎn)入了質(zhì)粒的小孢子篩選出來(lái)。 這是參考文獻(xiàn)報(bào)道設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)，但我是做植物的，周圍也沒(méi)人做過(guò)這么偏酵母方面的實(shí)驗(yàn)，很多實(shí)驗(yàn)的protocol和實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)都不清楚。 想請(qǐng)教幾個(gè)問(wèn)題： 1. 如何進(jìn)行四分體誘導(dǎo)？我從網(wǎng)上，國(guó)內(nèi)國(guó)外的實(shí)驗(yàn)室，搜到了很多protocol，但做法細(xì)節(jié)各異，想請(qǐng)問(wèn)常用的有哪種，需要注意些什么，是否條件合適了就可以將所有細(xì)胞誘導(dǎo)成四分體呢 2.我是否需要將四分體進(jìn)行顯微解剖呢？那套設(shè)備實(shí)在太專了，我們這里沒(méi)有，我目前覺(jué)得不需要，只要在雙抗性上生長(zhǎng)，不帶抗性的小孢子會(huì)死掉�？晌覔�(dān)心無(wú)法使所有的細(xì)胞都誘導(dǎo)成小孢子，另外會(huì)不會(huì)那些最早誘導(dǎo)出四分體的細(xì)胞分離出的小孢子又重新進(jìn)行有性生殖而變成了雜合體的二倍體呢 非常抱歉，啰嗦了這么多，還希望表達(dá)清楚了。 還望不吝賜教！ 另外我想請(qǐng)問(wèn)，有前輩知道河北石家莊市哪個(gè)單位有酵母顯微操作儀嗎？ |
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2樓2015-03-03 11:14:27
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3樓2016-04-29 17:14:56
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我來(lái)挖墳了……抱歉沒(méi)有當(dāng)時(shí)看到。實(shí)驗(yàn)做完了，我一個(gè)做植物的，硬生生獨(dú)立開(kāi)展了一年酵母遺傳操作。這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)必須使用酵母顯微操作儀，我后來(lái)是在網(wǎng)上偶然看到有一家北京的公司在推廣英國(guó)品牌的酵母顯微操作儀（小型的，基本就是在普通光學(xué)顯微鏡載物臺(tái)上裝了一套手動(dòng)顯微操作儀），可以網(wǎng)上預(yù)約使用，就填寫了申請(qǐng)，他們公司還是很講信用，兩個(gè)人，一個(gè)工程師，一個(gè)銷售，拖著一個(gè)很大的箱子就來(lái)了，我花了一周時(shí)間進(jìn)行了顯微操作，把四分體都挑了出來(lái)，并進(jìn)行了單孢子分離 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
4樓2018-03-21 04:25:53
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我來(lái)挖墳了……抱歉沒(méi)有當(dāng)時(shí)看到。實(shí)驗(yàn)做完了，我一個(gè)做植物的，硬生生獨(dú)立開(kāi)展了一年酵母遺傳操作。這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)必須使用酵母顯微操作儀，我后來(lái)是在網(wǎng)上偶然看到有一家北京的公司在推廣英國(guó)品牌的酵母顯微操作儀（小型的，基本就是在普通光學(xué)顯微鏡載物臺(tái)上裝了一套手動(dòng)顯微操作儀），可以網(wǎng)上預(yù)約使用，就填寫了申請(qǐng)，他們公司還是很講信用，兩個(gè)人，一個(gè)工程師，一個(gè)銷售，拖著一個(gè)很大的箱子就來(lái)了，我花了一周時(shí)間進(jìn)行了顯微操作，把四分體都挑了出來(lái)，并進(jìn)行了單孢子分離 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
5樓2018-03-21 04:26:11
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