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[求助]
請教釀酒酵母出孢子試驗及酵母顯微操作儀 已有1人參與
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各位前輩，我有些問題想請教。 我從酵母突變體庫購買的二倍體釀酒酵母，所關心的基因位點是雜合的，是使用kanMX4編碼片段進行的同源重組，帶G418的抗性，菌株親本是BY4743。 我想用帶有我目的基因的質粒（URA篩選標記），先轉進這個雜合體中，再通過誘導酵母產生四分體小孢子的方法，在G418 / -ura 的雙篩選平板上將既是knockout又轉入了質粒的小孢子篩選出來。 這是參考文獻報道設計的實驗，但我是做植物的，周圍也沒人做過這么偏酵母方面的實驗，很多實驗的protocol和實驗細節(jié)都不清楚。 想請教幾個問題： 1. 如何進行四分體誘導？我從網上，國內國外的實驗室，搜到了很多protocol，但做法細節(jié)各異，想請問常用的有哪種，需要注意些什么，是否條件合適了就可以將所有細胞誘導成四分體呢 2.我是否需要將四分體進行顯微解剖呢？那套設備實在太專了，我們這里沒有，我目前覺得不需要，只要在雙抗性上生長，不帶抗性的小孢子會死掉。可我擔心無法使所有的細胞都誘導成小孢子，另外會不會那些最早誘導出四分體的細胞分離出的小孢子又重新進行有性生殖而變成了雜合體的二倍體呢 非常抱歉，啰嗦了這么多，還希望表達清楚了。 還望不吝賜教！ 另外我想請問，有前輩知道河北石家莊市哪個單位有酵母顯微操作儀嗎？ |
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5樓2018-03-21 04:26:11
3樓2016-04-29 17:14:56
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我來挖墳了……抱歉沒有當時看到。實驗做完了，我一個做植物的，硬生生獨立開展了一年酵母遺傳操作。這項實驗必須使用酵母顯微操作儀，我后來是在網上偶然看到有一家北京的公司在推廣英國品牌的酵母顯微操作儀（小型的，基本就是在普通光學顯微鏡載物臺上裝了一套手動顯微操作儀），可以網上預約使用，就填寫了申請，他們公司還是很講信用，兩個人，一個工程師，一個銷售，拖著一個很大的箱子就來了，我花了一周時間進行了顯微操作，把四分體都挑了出來，并進行了單孢子分離 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2018-03-21 04:25:53
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