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shxteacher鐵桿木蟲 (正式寫手)
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[求助]
關(guān)于E.coli分泌的重組蛋白提取 已有1人參與
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通過pelB信號肽（或其它信號肽）將目的蛋白分泌至E.coli的周質(zhì)空間，第一次做大腸桿菌分泌外源蛋白，問題來了， 現(xiàn)在我搞不清：如果我要收集目的蛋白， <1>是離心取培養(yǎng)液清液（目的蛋白分泌至培養(yǎng)液中）？ <2>離心收集細胞，破碎細胞，收集蛋白（目的蛋白在周質(zhì)空間，無法進入培養(yǎng)液，需要破碎細胞收集）？ 哪位大俠做過大腸桿菌分泌表達系統(tǒng)，請不吝賜教��？ |
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lxj341401
至尊木蟲 (著名寫手)
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【答案】應助回帖
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感謝參與，應助指數(shù) +1
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shxteacher(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2015-01-04 21:18:03
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兩種方法都不對，第二種方法雖然可以獲得目的蛋白，但是把胞內(nèi)蛋白也收集了，跟胞內(nèi)表達沒區(qū)別啦。 正確的方法分子克隆和文獻上有，叫滲透壓休克法，收集細胞后重懸于蔗糖溶液，冰浴后加低滲溶液，離心收集上清。 [ 發(fā)自手機版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
2樓2015-01-04 20:07:12
流水不爭
鐵桿木蟲 (正式寫手)
小木蟲
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3樓2017-02-10 21:48:57
SherryChen32
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4樓2018-02-28 10:13:09
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