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lindanana新蟲 (著名寫手)
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[求助]
蛋白脫鹽問題 已有6人參與
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現(xiàn)有約4 mg糖蛋白（分子量55 kD）的含鹽溶液150 mL，溶液體系是2XSDS蛋白電泳緩沖液（即50 mM的Tris、384 mM的甘氨酸、7.34 mM的SDS），想要除鹽且盡量減少糖蛋白的損失，活性暫且不考慮，應(yīng)該用什么方法呢？本人已用過C18 SPE小柱和超濾離心管（截留分子量30 kD），發(fā)現(xiàn)效果很差，原因可能是脫鹽前先用蛋白旋轉(zhuǎn)濃縮儀進行了濃縮（濃縮溫度60度，時間長達一天，濃縮至4毫升左右，發(fā)現(xiàn)溶液顏色由無色變?yōu)闇\綠色），導(dǎo)致有大量的鹽析出，再跑電泳時發(fā)現(xiàn)條帶變很淺甚至消失了，所以超濾離心除鹽這條路走不通了；然后又試了試濃縮一段時間（濃縮體積至20 mL），在鹽析出前進行C18小柱蛋白脫鹽，發(fā)現(xiàn)脫鹽前有的條帶脫鹽后又沒了，不知道什么原因。 請問各位大神，該怎么脫鹽并且進行濃縮呢，可不可以用透析試試，會造成蛋白大的損失嗎？謝謝！ |
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5樓2017-02-10 12:19:14
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