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lindanana新蟲 (著名寫手)
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蛋白脫鹽問題 已有6人參與
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現(xiàn)有約4 mg糖蛋白(分子量55 kD)的含鹽溶液150 mL,溶液體系是2XSDS蛋白電泳緩沖液(即50 mM的Tris、384 mM的甘氨酸、7.34 mM的SDS),想要除鹽且盡量減少糖蛋白的損失,活性暫且不考慮,應(yīng)該用什么方法呢?本人已用過C18 SPE小柱和超濾離心管(截留分子量30 kD),發(fā)現(xiàn)效果很差,原因可能是脫鹽前先用蛋白旋轉(zhuǎn)濃縮儀進行了濃縮(濃縮溫度60度,時間長達一天,濃縮至4毫升左右,發(fā)現(xiàn)溶液顏色由無色變?yōu)闇\綠色),導(dǎo)致有大量的鹽析出,再跑電泳時發(fā)現(xiàn)條帶變很淺甚至消失了,所以超濾離心除鹽這條路走不通了;然后又試了試濃縮一段時間(濃縮體積至20 mL),在鹽析出前進行C18小柱蛋白脫鹽,發(fā)現(xiàn)脫鹽前有的條帶脫鹽后又沒了,不知道什么原因。 請問各位大神,該怎么脫鹽并且進行濃縮呢,可不可以用透析試試,會造成蛋白大的損失嗎?謝謝! |
銅蟲 (小有名氣)

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