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外源質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化大腸桿菌 已有3人參與
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摘要：轉(zhuǎn)化是將外源DNA分子通過(guò)物理或化學(xué)的方法導(dǎo)入基因工程細(xì)菌中的過(guò)程,是基因工程等研究領(lǐng)域的基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)之一。 1 .實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介 轉(zhuǎn)化是將外源DNA分子通過(guò)物理或化學(xué)的方法導(dǎo)入基因工程細(xì)菌中的過(guò)程,是基因工程等研究領(lǐng)域的基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)之一�，F(xiàn)演示利用化學(xué)的方法(熱擊法)：使用化學(xué)試劑(如CaCl2)制備的感受態(tài)細(xì)胞,通過(guò)熱擊處理將載體DNA分子導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞中。 實(shí)驗(yàn)中使用的主要儀器：電熱恒溫水槽 超凈工作臺(tái) 臺(tái)式離心機(jī) 電熱恒溫震蕩器 電熱恒溫 培養(yǎng)箱 2. 熱擊 DNA連接產(chǎn)物與大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞冰浴30min后,放置42攝氏度水浴鍋中,熱擊90秒,后迅速將大腸桿菌轉(zhuǎn)移到冰水中放置2-3min。 3 .大腸桿菌復(fù)蘇 上步熱擊后,一般都要對(duì)菌體進(jìn)行一次復(fù)蘇過(guò)程,向熱擊加入600-800 ul37攝氏度預(yù)熱的無(wú)抗生素LB培養(yǎng)基后,置于搖床上37氏度,150rpm復(fù)蘇培養(yǎng)45～60min。 4 .涂板培養(yǎng) 復(fù)蘇后,收集的菌體去除部分上清液,預(yù)留100ul左右的菌液懸浮,用移液槍將重懸的菌加到抗性固體LB培養(yǎng)基中,用涂棒將菌涂布均勻,37攝氏度倒置培養(yǎng)12小時(shí)。 |
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