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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 綜合其他 » 外源質粒DNA轉化大腸桿菌
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外源質粒DNA轉化大腸桿菌 已有3人參與
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摘要：轉化是將外源DNA分子通過物理或化學的方法導入基因工程細菌中的過程,是基因工程等研究領域的基本實驗技術之一。 1 .實驗簡介 轉化是將外源DNA分子通過物理或化學的方法導入基因工程細菌中的過程,是基因工程等研究領域的基本實驗技術之一�，F演示利用化學的方法(熱擊法)：使用化學試劑(如CaCl2)制備的感受態(tài)細胞,通過熱擊處理將載體DNA分子導入大腸桿菌細胞中。 實驗中使用的主要儀器：電熱恒溫水槽 超凈工作臺 臺式離心機 電熱恒溫震蕩器 電熱恒溫 培養(yǎng)箱 2. 熱擊 DNA連接產物與大腸桿菌感受態(tài)細胞冰浴30min后,放置42攝氏度水浴鍋中,熱擊90秒,后迅速將大腸桿菌轉移到冰水中放置2-3min。 3 .大腸桿菌復蘇 上步熱擊后,一般都要對菌體進行一次復蘇過程,向熱擊加入600-800 ul37攝氏度預熱的無抗生素LB培養(yǎng)基后,置于搖床上37氏度,150rpm復蘇培養(yǎng)45～60min。 4 .涂板培養(yǎng) 復蘇后,收集的菌體去除部分上清液,預留100ul左右的菌液懸浮,用移液槍將重懸的菌加到抗性固體LB培養(yǎng)基中,用涂棒將菌涂布均勻,37攝氏度倒置培養(yǎng)12小時。 |
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