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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 生物化學 » 質粒提取問題
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| 查看: 2146 | 回復: 8 | ||
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[求助]
質粒提取問題 已有1人參與
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我做了點突，送去測序正確，然后用剩余質粒進行轉化然后涂板，菌可以長起來，然后那LB培養(yǎng)基進行搖菌，12個多小時搖不起來菌～你知道要怎么辦？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+4, 鼓勵回帖交流 2017-10-01 09:45:47
感謝參與，應助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+4, 鼓勵回帖交流 2017-10-01 09:45:47
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我覺得有兩方面你可以注意下： 1、片斷產物有毒，細菌都死掉了。 這是我以前遇到過的情況，過夜搖菌后，第二天可見，細菌聚集成顆粒狀，提得質粒濃度很低，后來發(fā)現(xiàn)是細菌都死掉了，質粒降解了，所以量很低，可能目的基因所表達的蛋白對細菌有毒，后來我換了一下菌株，使用Xl－blue，提質粒就好了。 2、有無雜菌污染，Amp培養(yǎng)基搖菌時，由于細菌會把Amp抗生素(antibiotic)降解掉，造成抗生濃度降低，后果就是無抗性細菌瘋狂生長，原因就是在抗性菌和非抗性菌都能生長的條件下，非抗性菌具有生長優(yōu)勢，另外菌體里含質�？截悢�(shù)低的細菌較高的細菌具有生長優(yōu)勢。所以大提質粒時，要從新鮮平板上挑取單克隆細菌去搖菌，避免雜菌干擾質粒抽提，過夜培養(yǎng)的時間不要過長。 |
3樓2017-09-30 20:13:12
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謝謝您，我的質粒是在做點突，所以應該可以排除片段有毒，而且過夜搖菌的培養(yǎng)基很清澈。 現(xiàn)在懷疑是不是板子或者Amp+的問題，真的很疑惑～因為我也是重新用測序正確的質粒重新進行轉化，LB也沒問題，板子長得也不錯， 也確定挑出來菌了。現(xiàn)在很疑惑 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
4樓2017-09-30 21:11:02
送紅花一朵 |
謝謝您，我的質粒是在做點突，所以應該可以排除片段有毒，而且過夜搖菌的培養(yǎng)基很清澈。 現(xiàn)在懷疑是不是板子或者Amp+的問題，真的很疑惑～因為我也是重新用測序正確的質粒重新進行轉化，LB也沒問題，板子長得也不錯， 也確定挑出來菌了�，F(xiàn)在很疑惑，謝謝您 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
5樓2017-09-30 22:25:31
ULYSSEESWB
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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- 專業(yè): 藥理學其他科學問題
6樓2017-10-01 08:47:55
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