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蠟筆小case新蟲 (初入文壇)
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[求助]
質(zhì)粒提取問題 已有1人參與
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我做了點(diǎn)突，送去測序正確，然后用剩余質(zhì)粒進(jìn)行轉(zhuǎn)化然后涂板，菌可以長起來，然后那LB培養(yǎng)基進(jìn)行搖菌，12個(gè)多小時(shí)搖不起來菌～你知道要怎么辦？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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2樓2017-09-30 12:40:48
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+4, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-10-01 09:45:47
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+4, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-10-01 09:45:47
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我覺得有兩方面你可以注意下： 1、片斷產(chǎn)物有毒，細(xì)菌都死掉了。 這是我以前遇到過的情況，過夜搖菌后，第二天可見，細(xì)菌聚集成顆粒狀，提得質(zhì)粒濃度很低，后來發(fā)現(xiàn)是細(xì)菌都死掉了，質(zhì)粒降解了，所以量很低，可能目的基因所表達(dá)的蛋白對細(xì)菌有毒，后來我換了一下菌株，使用Xl－blue，提質(zhì)粒就好了。 2、有無雜菌污染，Amp培養(yǎng)基搖菌時(shí)，由于細(xì)菌會把Amp抗生素(antibiotic)降解掉，造成抗生濃度降低，后果就是無抗性細(xì)菌瘋狂生長，原因就是在抗性菌和非抗性菌都能生長的條件下，非抗性菌具有生長優(yōu)勢，另外菌體里含質(zhì)�？截悢�(shù)低的細(xì)菌較高的細(xì)菌具有生長優(yōu)勢。所以大提質(zhì)粒時(shí)，要從新鮮平板上挑取單克隆細(xì)菌去搖菌，避免雜菌干擾質(zhì)粒抽提，過夜培養(yǎng)的時(shí)間不要過長。 |
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3樓2017-09-30 20:13:12
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謝謝您，我的質(zhì)粒是在做點(diǎn)突，所以應(yīng)該可以排除片段有毒，而且過夜搖菌的培養(yǎng)基很清澈。 現(xiàn)在懷疑是不是板子或者Amp+的問題，真的很疑惑～因?yàn)槲乙彩侵匦掠脺y序正確的質(zhì)粒重新進(jìn)行轉(zhuǎn)化，LB也沒問題，板子長得也不錯(cuò)， 也確定挑出來菌了�，F(xiàn)在很疑惑 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
4樓2017-09-30 21:11:02
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送紅花一朵 |
謝謝您，我的質(zhì)粒是在做點(diǎn)突，所以應(yīng)該可以排除片段有毒，而且過夜搖菌的培養(yǎng)基很清澈。 現(xiàn)在懷疑是不是板子或者Amp+的問題，真的很疑惑～因?yàn)槲乙彩侵匦掠脺y序正確的質(zhì)粒重新進(jìn)行轉(zhuǎn)化，LB也沒問題，板子長得也不錯(cuò)， 也確定挑出來菌了�，F(xiàn)在很疑惑，謝謝您 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
5樓2017-09-30 22:25:31
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7樓2017-10-01 19:24:44
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8樓2017-10-03 13:26:16
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9樓2017-10-04 10:27:17
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