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yuevis銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
芽孢桿菌的同源重組 已有1人參與
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我想做多黏芽孢桿菌的同源重組，敲除以及交換基因片段，應(yīng)該用什么質(zhì)粒?文獻(xiàn)里有的質(zhì)粒太貴，有的都沒(méi)有賣(mài)……請(qǐng)問(wèn)這方面的大神一般用什么質(zhì)粒? 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
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pET28a可以用來(lái)做E. coli表達(dá)蛋白，應(yīng)該不能用于芽孢桿菌的基因敲除 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
5樓2017-07-18 12:37:02
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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1、pET28a。 2、PET-28a表達(dá)載體具有T7啟動(dòng)子及l(fā)ac調(diào)控子，需要較高的IPTG起始濃度才能啟動(dòng)有效表達(dá)，可使用1mM-2mM，而大家平時(shí)使用的IPTG濃度一般為0.1mM，所以建議大家提高IPTG的濃度。而加入IPTG的時(shí)機(jī)，一般要求菌液OD600達(dá)到0.3-0.5時(shí)再加入，因?yàn)镮PTG對(duì)于細(xì)菌具有較高的毒性，加入過(guò)早，會(huì)致使細(xì)菌生長(zhǎng)非常緩慢，甚至死亡。 |
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yuevis2樓2017-07-17 23:22:30
yuevis
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3樓2017-07-18 00:03:37
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4樓2017-07-18 00:04:36
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