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藥娘子新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞，平板篩選不長(zhǎng)菌？ 已有5人參與
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將提取的質(zhì)粒（卡那抗性）轉(zhuǎn)到BL21，陰性對(duì)照和實(shí)驗(yàn)組都沒(méi)長(zhǎng)菌，其中用到的BL21是課題組其他同學(xué)曾成功轉(zhuǎn)化的，質(zhì)粒的濃度是13.7ng/微升，10微升質(zhì)粒對(duì)50微升BL21，接下來(lái)我要怎樣修改實(shí)驗(yàn)方案才能轉(zhuǎn)化成功？求給建議 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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藥娘子
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謝謝您。轉(zhuǎn)化步驟是 1 無(wú)菌臺(tái)中，于冰上，分別取50微升的BL21 和10微升質(zhì)粒加到Ep管中 2 冰上放置30min 3 42℃熱激45s 4 冰上放置1-2min 5 無(wú)菌臺(tái)中，加入500微升37℃預(yù)熱好的LB培養(yǎng)基，200rpm, 1h, 37℃ 6 濃縮: 沒(méi)有在無(wú)菌臺(tái)，6000rpm 3min離心，然后取出400微升，余下的160微升重懸， 7 涂平板: 無(wú)菌臺(tái)中，用余下的160微升涂平板，（氨芐抗性，卡那抗性各涂了一個(gè)） 陰性對(duì)照: 無(wú)菌水代替了質(zhì)粒 空白對(duì)照:什么都沒(méi)加 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 所以平板都沒(méi)有長(zhǎng) 求建議。謝謝 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
5樓2017-09-22 09:37:45
2樓2017-09-22 09:10:48
藥娘子
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感受態(tài)細(xì)胞保存于-80℃，一般來(lái)說(shuō)，50微升感受態(tài)細(xì)胞不是對(duì)應(yīng)50-100ng的質(zhì)粒嗎？ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
3樓2017-09-22 09:13:06
原來(lái)，是這樣
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drwhoknowss: 金幣+1, 可行 2018-02-08 04:02:28
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你拿個(gè)陽(yáng)性質(zhì)粒再轉(zhuǎn)化試試，看看轉(zhuǎn)化效率怎么樣，感受態(tài)到底失活沒(méi)有。如果沒(méi)有那就是你轉(zhuǎn)化步驟哪一步出問(wèn)題了，可以把你的轉(zhuǎn)化步驟發(fā)一下，給你參考參考。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
4樓2017-09-22 09:15:22
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