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藥娘子新蟲 (小有名氣)
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轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞，平板篩選不長菌？ 已有5人參與
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將提取的質(zhì)粒（卡那抗性）轉(zhuǎn)到BL21，陰性對照和實(shí)驗(yàn)組都沒長菌，其中用到的BL21是課題組其他同學(xué)曾成功轉(zhuǎn)化的，質(zhì)粒的濃度是13.7ng/微升，10微升質(zhì)粒對50微升BL21，接下來我要怎樣修改實(shí)驗(yàn)方案才能轉(zhuǎn)化成功？求給建議 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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原來，是這樣
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你拿個(gè)陽性質(zhì)粒再轉(zhuǎn)化試試，看看轉(zhuǎn)化效率怎么樣，感受態(tài)到底失活沒有。如果沒有那就是你轉(zhuǎn)化步驟哪一步出問題了，可以把你的轉(zhuǎn)化步驟發(fā)一下，給你參考參考。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2017-09-22 09:15:22
ytt1109
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12樓2017-11-04 22:06:48
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你的感受態(tài)為什么要吸取50ul，一般不都是50ul或者100ul分裝一個(gè)ep管的么。步驟沒有什么大問題，我一般熱激90s。從你的步驟看來很大概率是感受態(tài)不行了。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2017-09-22 09:51:19
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9樓2017-09-22 11:43:56
小陽sunny
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質(zhì)粒的量太多了了吧，熱激時(shí)間有點(diǎn)短，一般是90s。不過這個(gè)應(yīng)該不是問題。陰性對照和空白對照由于BL21菌株沒有抗性所以不會長的。建議拿一個(gè)確定正常的質(zhì)粒和一個(gè)確定沒問題的感受態(tài)細(xì)胞分別做陽性對照。看下是你的質(zhì)粒有問題還是BL21感受態(tài)細(xì)胞有問題 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
10樓2017-09-22 12:00:47
mfl梅鳳玲
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11樓2017-09-29 09:12:47
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初看后，兩個(gè)建議：一是質(zhì)粒濃度有點(diǎn)低，一般地，最少也有好幾十納克每微升，你可以考慮重提質(zhì)粒；二是，可能這一批感受態(tài)有問題，不好；三是，其它不明原因，生物實(shí)驗(yàn)就是這樣，如果不能反思出明顯出錯(cuò)的地方，建議還是認(rèn)真嚴(yán)謹(jǐn)?shù)卦僦刈�，不要糾結(jié)于失敗原因，因?yàn)楹芏嘤肋h(yuǎn)也搞不清楚的。祝好！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
14樓2018-01-05 00:10:09
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感受態(tài)細(xì)胞保存于-80℃，一般來說，50微升感受態(tài)細(xì)胞不是對應(yīng)50-100ng的質(zhì)粒嗎？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2017-09-22 09:13:06
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謝謝您。轉(zhuǎn)化步驟是 1 無菌臺中，于冰上，分別取50微升的BL21 和10微升質(zhì)粒加到Ep管中 2 冰上放置30min 3 42℃熱激45s 4 冰上放置1-2min 5 無菌臺中，加入500微升37℃預(yù)熱好的LB培養(yǎng)基，200rpm, 1h, 37℃ 6 濃縮: 沒有在無菌臺，6000rpm 3min離心，然后取出400微升，余下的160微升重懸， 7 涂平板: 無菌臺中，用余下的160微升涂平板，（氨芐抗性，卡那抗性各涂了一個(gè)） 陰性對照: 無菌水代替了質(zhì)粒 空白對照:什么都沒加 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 所以平板都沒有長 求建議。謝謝 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2017-09-22 09:37:45
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對��！100微升一管，取出50微升。我也懷疑是感受態(tài)細(xì)胞的問題，所以換了一個(gè)曾成功轉(zhuǎn)化的感受態(tài)，但也沒有長，是不是我自已的問題啊 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2017-09-22 10:10:48
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8樓2017-09-22 11:10:54
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