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T4 DNA連接酶怎么提高連接效率 已有2人參與
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我用T4 DNA 連接酶連接磷酸化以后的5'和3'的羥基，請問怎么提高連接效率。我用的條件是25℃過夜，酶濃度是DNA濃度的10倍，求大神指點 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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didongwei
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solutionI本身就含有連接酶，且buffer不一樣，連接效率就有很大差別，有些稀有酶切位點連接效率低，可以試試這個方法，我之前換過后，連接成功了 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
5樓2017-10-11 10:39:33
【答案】應(yīng)助回帖
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以T4連接酶進(jìn)行連接的方法，這兩種方法轉(zhuǎn)化子比較多，陽性率也不錯，唯一的不足就是連接的時間長。因為連接時間越長效率越高，一般快速連接方法需要半個小時到一個小時；達(dá)到最佳的效果，要過夜連接。 以拓?fù)洚悩?gòu)酶（TOPO）進(jìn)行連接的方法，這種方法的優(yōu)勢是快速連接，在5-15分鐘就可以將目的基因克隆到載體中，陽性率比較高，這種方法國內(nèi)也有人模仿。這種方法雖然速度快，但是也有一些缺陷，比如長片段連接效率不如T4連接酶，轉(zhuǎn)化子少，TOPO酶對溫度很敏感，穩(wěn)定性較差。 |
2樓2017-10-09 21:19:53
didongwei
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3樓2017-10-09 22:56:31
4樓2017-10-11 10:33:20
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