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carolyn_cat新蟲 (小有名氣)
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摘要翻譯
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【摘要】 目的 旨在在HEK293細胞系和Flp-IN-CHO細胞中構建穩(wěn)定表達超極化激活環(huán)核苷酸門控鉀通道亞型4(HCN4)的穩(wěn)定細胞系，并對其通道的表達進行鑒定。 方法 利用Lipofectamine2000將pCDNA3．1(+)-HCN4分別轉染進入HEK293細胞和Flp-IN-CHO細胞中，并通過G418和潮霉素B分別對其進行篩選，獲得陽性單克隆細胞系，采用全細胞膜片鉗技術對篩選出的單克隆細胞進行表達水平的鑒定，測定pCDNA3．1(+)-HCN4 所介導的快速激活延遲整流鉀電流(If)。結果 全細胞膜片鉗實驗在篩選出的單克隆細胞中記錄到超極化激活的非選擇內向陽離子電流(If)。 結論 該方法有效地將目的基因轉染進入HEK293細胞和Flp-IN-CHO細胞中，并能穩(wěn)定表達HCN4通道蛋白。HCN4通道基因重組載體的成功構建為進一步研究該離子通道的電生理功能及在疾病治療方面的潛在應用價值奠定了基礎。 |
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genhunter
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【答案】應助回帖
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carolyn_cat: 金幣+55, 翻譯EPI+1, ★★★★★最佳答案 2015-05-11 15:43:29
carolyn_cat: 金幣+55, 翻譯EPI+1, ★★★★★最佳答案 2015-05-11 15:43:29
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oh. We established cell lines that express ultra polarized cAMP activated gate control potassium channel subtype 4(太專業(yè)了lz自己翻譯核對吧) (HCN4) from HEK293 and Flp-IN-CHO parent lines and characterized the channel activity on these lines. |
5樓2015-05-11 15:41:44
genhunter
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【答案】應助回帖
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【摘要】 目的 旨在在HEK293細胞系和Flp-IN-CHO細胞中構建穩(wěn)定表達超極化激活環(huán)核苷酸門控鉀通道亞型4(HCN4)的穩(wěn)定細胞系，并對其通道的表達進行鑒定。 Abstract We established cell lines that express ultra polarized cAMP activated gate control potassium channel subtype 4(太專業(yè)了lz自己翻譯核對吧) (HCN4) from HEK293 and Flp-IN-CHO parent lines. 方法 利用Lipofectamine2000將pCDNA3．1(+)-HCN4分別轉染進入HEK293細胞和Flp-IN-CHO細胞中，并通過G418和潮霉素B分別對其進行篩選，獲得陽性單克隆細胞系，采用全細胞膜片鉗技術對篩選出的單克隆細胞進行表達水平的鑒定，測定pCDNA3．1(+)-HCN4 所介導的快速激活延遲整流鉀電流(If)。 Method: We used Lipofectamine 2000-mediated transient transfection to introduce pCDNA3.1(+)-HCN4 plasmids into HEK293 and Flp-IN-CHO parent lines, respectively, followed by G418 and B selections , to obtain positive colonies. We then used whole cell membrane clumping technique to assess the level of gene expression by measuring pCDNA3．1(+)-HCN4-dependent 快速激活延遲整流鉀電流 (太專業(yè)了lz自己翻譯吧) channel activities (If) . 結果 全細胞膜片鉗實驗在篩選出的單克隆細胞中記錄到超極化激活的非選擇內向陽離子電流(If)。 Results Whole cell membrane clumping technique was used successfully to record the ultra polarized activation of non-selective inward cation current on monoclonal stable cell lines. 結論 該方法有效地將目的基因轉染進入HEK293細胞和Flp-IN-CHO細胞中，并能穩(wěn)定表達HCN4通道蛋白。HCN4通道基因重組載體的成功構建為進一步研究該離子通道的電生理功能及在疾病治療方面的潛在應用價值奠定了基礎。 Conclusion: This methodology can be used to introduce target genes into HEK293 and Flp-IN-CHO cells by transfection and stably express HCN4 channel protein. The construction of expression plasmid for HCN4 gene and stable lines pave the road for further electrophysiology studies for its normal function and potential application in treating certain diseases. |
3樓2015-05-11 15:25:29
carolyn_cat
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