 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 6149 | 回復(fù): 12 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
yonghui0539金蟲 (初入文壇)
|
[求助]
gateway -LR反應(yīng)，請(qǐng)知道的幫忙 已有1人參與
|
|
|
新手在此請(qǐng)教。 我用gateway，LR反應(yīng)總是不成功，涂板子不長(zhǎng)。找不到原因，在此發(fā)帖尋求幫助，多些人多些建議，先謝謝各位。 下面是我做得過程： 1. 首先拿到entry clone（這個(gè)是一個(gè)博后做的，走了）好像是合成的目的片段，然后送到公司他們做得BP反應(yīng)。我拿到的還有光盤，里面都是PDF文件關(guān)于這個(gè)entry clone的，所以我覺得應(yīng)該是沒有問題的。我就直接擴(kuò)增了entry clone，提取了質(zhì)粒，酶切檢測(cè)也是對(duì)的，我沒有測(cè)序。 2. 我在實(shí)驗(yàn)室管理員那里找到了destination vector，然后也擴(kuò)增了，挺好的，沒有問題，然后提質(zhì)粒，然后我用酶切檢測(cè)質(zhì)粒也是對(duì)的（實(shí)驗(yàn)室之前都是用這個(gè)載體，應(yīng)該也不會(huì)有問題） entry clone 和目的載體都有了，我就直接LR反應(yīng)了，然后問題也來了。 entry clone（100ng） 1ul destination（100ng） 2ul 酶 1ul TE 1ul 或者 entry clone（30ng） 3ul destination（120ng） 1ul 酶 1ul 反應(yīng)過夜也沒有長(zhǎng)菌落，然后我就又調(diào)整體系和濃度，也不行。我看有些說明說需要線性化載體，我也酶切了，還是沒有成功，做了2個(gè)星期。我覺得平板和抗生素都應(yīng)該沒有問題，LR反應(yīng)的酶也應(yīng)該沒有問題，我做個(gè)陽性對(duì)照，成功了，雖然長(zhǎng)得克隆少點(diǎn)。但是在12h長(zhǎng)，最起碼長(zhǎng)了。 要是有比較好的建議請(qǐng)告訴我，謝謝 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有96人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
芳5992
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 28.3
- 帖子: 11
- 在線: 3.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 6283627
- 注冊(cè): 2017-04-10
- 專業(yè): 植物遺傳學(xué)
6樓2017-08-21 12:43:11
sunshine436
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 17 (小學(xué)生)
- 金幣: 2018.5
- 散金: 120
- 紅花: 2
- 帖子: 243
- 在線: 210.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 3375590
- 注冊(cè): 2014-08-20
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
2樓2016-04-16 04:10:08
hanxiaominhu
至尊木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 126 (高中生)
- 金幣: 25793.4
- 散金: 127
- 紅花: 14
- 帖子: 2978
- 在線: 846.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 1526260
- 注冊(cè): 2011-12-06
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
3樓2016-04-16 08:26:36
yonghui0539
金蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 654.8
- 散金: 30
- 帖子: 22
- 在線: 62.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 1427868
- 注冊(cè): 2011-10-05
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
4樓2016-04-18 11:47:35
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 暗涌afhb 2026-03-16 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 288求調(diào)劑 +15 | 于海海海海 2026-03-19 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 一志愿中海洋材料工程專碩330分求調(diào)劑 +7 | 小材化本科 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料工程專碩調(diào)劑 +5 | 204818@lcx 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 +5 | 安全上岸！ 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 08工科 320總分 求調(diào)劑 +5 | 梨花珞晚風(fēng) 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +6 | 26研0 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +11 | 冬十三 2026-03-15 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +12 | 小熊joy 2026-03-14 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +5 | △小透明* 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考博] 環(huán)境領(lǐng)域全國重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室招收博士1-2名 +3 | QGZDSYS 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)071000 329分求調(diào)劑 +3 | 我愛生物生物愛?/a> 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +5 | 時(shí)間點(diǎn) 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 11408 一志愿西電，277分求調(diào)劑
+3
|
zhouzhen654 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0854控制工程 359求調(diào)劑 可跨專業(yè) +3 | 626776879 2026-03-14 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +3 | 曼殊2266 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑 +6 | 太想進(jìn)步了0608 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 070303 總分349求調(diào)劑 +3 | LJY9966 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 277材料科學(xué)與工程080500求調(diào)劑 +3 | 自由煎餅果子 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 招收0805（材料）調(diào)劑 +3 | 18595523086 2026-03-13 | 3/150 |
|