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王木木2016新蟲 (小有名氣)
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[求助]
蛋白誘導(dǎo) 已有2人參與
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我誘導(dǎo)的蛋白，之前做實(shí)驗(yàn)是在包涵體中，這幾天再做實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移到上清液中了，請問大家是什么原因啊，上清中的目的蛋白可以用嗎？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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6樓2017-07-28 16:42:21
科學(xué)小覃
木蟲 (正式寫手)
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2樓2017-07-28 10:15:28
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+4, 鼓勵回帖交流 2017-07-29 12:05:41
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+4, 鼓勵回帖交流 2017-07-29 12:05:41
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目的蛋白能同時存在于上清和包涵體中 1）你應(yīng)該是沒有明白什么是包涵體,簡單的說就是翻譯的蛋白沒有正確折疊而聚集在一起形成的,主要的是疏水作用.實(shí)際上就是很多個蛋白分子,這些蛋白并不是交聯(lián)在一起的,用高濃度的尿素和鹽酸胍可以使他們變性,解聚. 2）用沉淀跑電泳可以確定目的蛋白是否在包涵體? 包涵體是不溶于水的,比較總蛋白.沉淀,及上清中的誘導(dǎo)帶就可以知道上清中有沒有你想要的可溶蛋白了 3）電泳檢測的話,可以用SDS-PAGE檢測,在上樣之前,需要用上樣緩沖液處理樣品,處理后,包涵體也就解聚了,每個蛋白分子與SDS結(jié)合,形成了可溶物. |
3樓2017-07-28 10:41:24
王木木2016
新蟲 (小有名氣)
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4樓2017-07-28 13:05:47
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