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王木木2016新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
蛋白誘導(dǎo) 已有2人參與
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我誘導(dǎo)的蛋白,之前做實(shí)驗(yàn)是在包涵體中,這幾天再做實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移到上清液中了,請(qǐng)問(wèn)大家是什么原因啊,上清中的目的蛋白可以用嗎? 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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目的蛋白能同時(shí)存在于上清和包涵體中 1)你應(yīng)該是沒(méi)有明白什么是包涵體,簡(jiǎn)單的說(shuō)就是翻譯的蛋白沒(méi)有正確折疊而聚集在一起形成的,主要的是疏水作用.實(shí)際上就是很多個(gè)蛋白分子,這些蛋白并不是交聯(lián)在一起的,用高濃度的尿素和鹽酸胍可以使他們變性,解聚. 2)用沉淀跑電泳可以確定目的蛋白是否在包涵體? 包涵體是不溶于水的,比較總蛋白.沉淀,及上清中的誘導(dǎo)帶就可以知道上清中有沒(méi)有你想要的可溶蛋白了 3)電泳檢測(cè)的話(huà),可以用SDS-PAGE檢測(cè),在上樣之前,需要用上樣緩沖液處理樣品,處理后,包涵體也就解聚了,每個(gè)蛋白分子與SDS結(jié)合,形成了可溶物. |

新蟲(chóng) (小有名氣)
新蟲(chóng) (小有名氣)
鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
新蟲(chóng) (小有名氣)
木蟲(chóng) (小有名氣)
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