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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » PCR相關 » qPCR引物篩選
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xmchh123456新蟲 (小有名氣)
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[求助]
qPCR引物篩選
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新手求教，請問熒光定量pcr如何進行引物篩選實驗？體系是多少，是用設計的引物進行正常pcr后看電泳結果是否有雜帶嗎，只跑出一條目的條帶是不是就說明這條引物可以用于熒光定量實驗？加96孔板前要進行預實驗熒光檢測嗎，怎么進行檢測呢？謝謝！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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- 專業(yè): 環(huán)境分析化學
 體系試劑什么都是一樣的。引物也不用篩選，直接在oligo或者PP5上設計出來給外面公司合成就行（賽默飛就很純，完全不用擔心有雜質）。引物一般是粉末狀給你的，建議你先把這個引物稀釋到適合濃度，然后去跑電泳，如果是一條帶就基本說明引物沒問題。做不出來一般都是你實驗操作和環(huán)境問題，引物的篩選如果你找個好公司的話完全可以偷下懶。可以設置一個陰性對照、陽性對照，可以分別看看是不是環(huán)境污染或是實驗步驟出錯。擴增效率沒問題情況是90%-110% R值最好>0.99 http://www.doc88.com/p-9955632672617.html |
xmchh123456
7樓2018-05-13 00:00:27
star013 
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2樓2018-05-12 19:47:11
3樓2018-05-12 20:50:13
xmchh123456
新蟲 (小有名氣)
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4樓2018-05-12 21:09:53
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