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xmchh123456新蟲 (小有名氣)
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[求助]
qPCR引物篩選
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新手求教，請(qǐng)問熒光定量pcr如何進(jìn)行引物篩選實(shí)驗(yàn)？體系是多少，是用設(shè)計(jì)的引物進(jìn)行正常pcr后看電泳結(jié)果是否有雜帶嗎，只跑出一條目的條帶是不是就說明這條引物可以用于熒光定量實(shí)驗(yàn)？加96孔板前要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)熒光檢測(cè)嗎，怎么進(jìn)行檢測(cè)呢？謝謝！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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2樓2018-05-12 19:47:11
3樓2018-05-12 20:50:13
xmchh123456
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4樓2018-05-12 21:09:53
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不是 很長(zhǎng)時(shí)間不做有點(diǎn)記不清了。記著是看qPCR結(jié)果里的一個(gè)圖。 引物二聚體和非特異擴(kuò)增的圖形不一樣。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2018-05-12 21:51:23
xmchh123456
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引物篩選就是直接拿引物進(jìn)行qPCR跑熒光定量檢測(cè)是否有雙峰嗎？如果有雙峰說明引物設(shè)計(jì)不好不能用是嗎？還是怎么篩選引物？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2018-05-12 22:09:34
wukangming
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 體系試劑什么都是一樣的。引物也不用篩選，直接在oligo或者PP5上設(shè)計(jì)出來給外面公司合成就行（賽默飛就很純，完全不用擔(dān)心有雜質(zhì)）。引物一般是粉末狀給你的，建議你先把這個(gè)引物稀釋到適合濃度，然后去跑電泳，如果是一條帶就基本說明引物沒問題。做不出來一般都是你實(shí)驗(yàn)操作和環(huán)境問題，引物的篩選如果你找個(gè)好公司的話完全可以偷下懶�？梢栽O(shè)置一個(gè)陰性對(duì)照、陽性對(duì)照，可以分別看看是不是環(huán)境污染或是實(shí)驗(yàn)步驟出錯(cuò)。擴(kuò)增效率沒問題情況是90%-110% R值最好>0.99 http://www.doc88.com/p-9955632672617.html |
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7樓2018-05-13 00:00:27
xmchh123456
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就是設(shè)計(jì)好引物然后直接擴(kuò)增跑電泳，如果檢測(cè)只有一條目的條帶就可以直接拿來這對(duì)引物來做熒光定量了是吧？熒光定量結(jié)果只要R方大于0.99，沒有雙峰就說明這次熒光定量實(shí)驗(yàn)結(jié)果能用是嗎 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2018-05-13 10:19:52
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