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蠟筆小case新蟲(chóng) (初入文壇)
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質(zhì)粒提取問(wèn)題 已有1人參與
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我做了點(diǎn)突，送去測(cè)序正確，然后用剩余質(zhì)粒進(jìn)行轉(zhuǎn)化然后涂板，菌可以長(zhǎng)起來(lái)，然后那LB培養(yǎng)基進(jìn)行搖菌，12個(gè)多小時(shí)搖不起來(lái)菌～你知道要怎么辦？ 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
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然然家的
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8樓2017-10-03 13:26:16
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+4, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-10-01 09:45:47
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+4, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-10-01 09:45:47
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我覺(jué)得有兩方面你可以注意下： 1、片斷產(chǎn)物有毒，細(xì)菌都死掉了。 這是我以前遇到過(guò)的情況，過(guò)夜搖菌后，第二天可見(jiàn)，細(xì)菌聚集成顆粒狀，提得質(zhì)粒濃度很低，后來(lái)發(fā)現(xiàn)是細(xì)菌都死掉了，質(zhì)粒降解了，所以量很低，可能目的基因所表達(dá)的蛋白對(duì)細(xì)菌有毒，后來(lái)我換了一下菌株，使用Xl－blue，提質(zhì)粒就好了。 2、有無(wú)雜菌污染，Amp培養(yǎng)基搖菌時(shí)，由于細(xì)菌會(huì)把Amp抗生素(antibiotic)降解掉，造成抗生濃度降低，后果就是無(wú)抗性細(xì)菌瘋狂生長(zhǎng)，原因就是在抗性菌和非抗性菌都能生長(zhǎng)的條件下，非抗性菌具有生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)，另外菌體里含質(zhì)粒拷貝數(shù)低的細(xì)菌較高的細(xì)菌具有生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)。所以大提質(zhì)粒時(shí)，要從新鮮平板上挑取單克隆細(xì)菌去搖菌，避免雜菌干擾質(zhì)粒抽提，過(guò)夜培養(yǎng)的時(shí)間不要過(guò)長(zhǎng)。 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
3樓2017-09-30 20:13:12
蠟筆小case
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謝謝您，我的質(zhì)粒是在做點(diǎn)突，所以應(yīng)該可以排除片段有毒，而且過(guò)夜搖菌的培養(yǎng)基很清澈。 現(xiàn)在懷疑是不是板子或者Amp+的問(wèn)題，真的很疑惑～因?yàn)槲乙彩侵匦掠脺y(cè)序正確的質(zhì)粒重新進(jìn)行轉(zhuǎn)化，LB也沒(méi)問(wèn)題，板子長(zhǎng)得也不錯(cuò)， 也確定挑出來(lái)菌了�，F(xiàn)在很疑惑 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
4樓2017-09-30 21:11:02
蠟筆小case
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送紅花一朵 |
謝謝您，我的質(zhì)粒是在做點(diǎn)突，所以應(yīng)該可以排除片段有毒，而且過(guò)夜搖菌的培養(yǎng)基很清澈。 現(xiàn)在懷疑是不是板子或者Amp+的問(wèn)題，真的很疑惑～因?yàn)槲乙彩侵匦掠脺y(cè)序正確的質(zhì)粒重新進(jìn)行轉(zhuǎn)化，LB也沒(méi)問(wèn)題，板子長(zhǎng)得也不錯(cuò)， 也確定挑出來(lái)菌了�，F(xiàn)在很疑惑，謝謝您 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
5樓2017-09-30 22:25:31
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