重組質(zhì)粒pcr的假陽性
在轉(zhuǎn)化板上挑取單克隆，液體培養(yǎng)后提取質(zhì)粒。
奇怪的是電泳顯示沒有提取到條帶，都是彌散的。
用這樣的“質(zhì)粒”樣品做pcr驗證，得到了很亮的目的條帶
想請問大家，是假陽性的概率大不大？
為什么會造成這樣的結(jié)果呢？
ps：插入的目的片段是個小片段。
返回小木蟲查看更多
今日熱帖
猜你喜歡
板塊導(dǎo)航
- 網(wǎng)絡(luò)生活
- 資源共享
- 化學(xué)化工
- 專業(yè)學(xué)科
- 科研生活
- 生物醫(yī)藥
- 材料
- 計算模擬
- 學(xué)術(shù)交流
- 出國留學(xué)
- 注冊執(zhí)考
24小時熱帖
換一批
- 下載小木蟲APP
- 與700萬科研達(dá)人隨時交流
-
二維碼
-
IOS
-
安卓
京公網(wǎng)安備 11010802022153號
測序，搞定……
我做的也是個終止子的小片段插入，菌落PCR結(jié)果很亮，陰性對照也出現(xiàn)了目的條帶，就是酶切切不出來，做了許多次都郁悶了�，F(xiàn)在改了實驗方案，把終止子后面加了些，總共600多bp，再看情況會怎么樣？
還是測序看看吧，另外可以換個試劑盒試試，看是否是試劑盒的問題。
是不是質(zhì)粒提取的操作有的地方不對啊，提出的質(zhì)粒不是很純，或者是電泳的影響也有可能吧
是手工提的質(zhì)粒，沒有用試劑盒。
質(zhì)粒也不大。
唉 不知道怎么回事
樓上：
建議：1。質(zhì)粒電泳是snear狀，說明你的質(zhì)粒轉(zhuǎn)進(jìn)去的不多
2.PCR擴增初目的帶，很正常啊，因為你還是有部分轉(zhuǎn)進(jìn)去的，雖然模板濃度低，但要知道PCR是指數(shù)級增長的，所以闊的出來
3.平板挑進(jìn)去液體培養(yǎng)基這步，懷疑有問題，是否存在選擇壓不夠的問題
4.建議從新做一遍、
希望對你有幫助，