DNA的沉淀問題
DNA(CTAB法大量提取,用于Southern雜交)用無水乙醇(或異丙醇)沉淀,發(fā)現(xiàn)有兩種形態(tài),一是DNA抱成團(tuán)狀,可用剪頭移液槍轉(zhuǎn)移;另一則是成散絮狀(碎片狀),只能用離心的方法得到沉淀;
誰能解釋一下不同形態(tài)形成的原因?是否與DNA濃度、質(zhì)量、以及材料處理方法有關(guān)?
本人今年一月份所沉的DNA均呈團(tuán)狀,而最近提的卻既有團(tuán)狀又有碎片狀,有一次甚至都是碎片狀。
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號
樓主有沒有考慮溫度的影響,現(xiàn)在和一月份的溫度上下相差超過十度!
還有樓主敘述的不詳細(xì),難道過去提取的和現(xiàn)在提取的DNA濃度質(zhì)量,材料處理方式相差很大嗎,樓主可否做一些重復(fù)性試驗(yàn)考察一下相關(guān)的條件的影響?
我感覺主要是濃度的問題,大了就成團(tuán)了
我所做的一月份和現(xiàn)在都是一樣的!實(shí)驗(yàn)過程都完全一樣,而且當(dāng)時(shí)是初學(xué),現(xiàn)在都提了好多次了。而且現(xiàn)在做的里面也有抱成團(tuán)狀的!應(yīng)該不是溫度原因
我也比照過,完全沒有問題都是嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)步驟操作的,以及各種細(xì)節(jié)方面也沒考慮到有什么問題。我也曾想過是量的原因,可是在書中沒找到相關(guān)介紹,但卻有對兩種情況的DNA轉(zhuǎn)移的方法!可見《分子克隆》496頁“分離平均大小為100-150kb的DNA”的b、c條
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我也覺得是濃度問題!但是我從葉片研磨程度,到取材的量都有所提高(比上次以及一月份)當(dāng)反而六管卻都成那樣了!哪有做何解釋?
研磨程度增大DNA會(huì)不會(huì)發(fā)生斷裂呢