色譜柱柱壓高的問題
色譜柱C18(5μm,4.6×150mm),有預柱,純乙腈柱壓50,純甲醇柱壓170,甲醇:水=70:30柱壓350,儀器通道很正常,壓力顯示也很正常,沒接柱子壓力顯示都很小。
1、我的柱子是不是堵了?如果堵了,怎么用乙腈柱壓還比較低呢?什么原因?怎么辦?
2、網上有的說可以將柱子以低流速反沖,這樣可以嗎?如果可以,流速多大,反沖多久(時間久了對柱子是不是不好。,用什么樣的流動相?
3、基線怎么總是向下漂?基線漂是什么原因?怎么處理?
4、柱子可以用NaOH溶液沖嗎?ph在那個范圍合適?估計是溶于堿性溶液的藥物進液相后ph變化導致藥物洗出(可能性大嗎?)。
[ Last edited by 1289622 on 2012-1-15 at 12:27 ]
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京公網安備 11010802022153號
1、應該是堵了,乙腈黏度小,本來柱壓就低
2、用什么沖取決于是什么物質造成的堵塞,如果是鹽的話,可以用90%水甲醇溶液沖,建議先正沖;如果不行再反沖,0.2-0.5ml/min沖一夜應該差不多。但要注意反沖后瑤反著用
3、這個不清楚具體原因
4、最好用三乙胺調pH在你的柱子容忍的范圍內(見你柱子的說明書)
看你色譜柱的型號了,有的柱子用甲醇柱壓就是高,可以打電話給工程師,他們會針對你買的柱子給出最合理的意見,包括能不能反沖及pH承受范圍的問題,因為有的柱子可以反沖,有的柱子不能。
不同柱子差異會很大,別人不了解你的柱子品牌型號,給出的意見都有限。。。
1、如果不加預柱的話,有是做生物基質,是很容易堵塞柱頭的;乙腈黏度小,沖洗HPLC柱子時反映出柱壓就低!
2、用什么沖取決于是什么物質造成的堵塞,如果是鹽的話,可以用90%水甲醇溶液沖,建議先正沖;如果不行再反沖,你用的柱子粗,要用0.5ml/min以上流速沖,1-2個小時候,發(fā)現(xiàn)柱壓平穩(wěn)了,
就差不多了。
但要注意反沖后要正著再沖回來,就是至少90%的乙腈再多沖洗二十分鐘以上后再進行測試!
3、若你走等度,監(jiān)測220nm和254nm,肯定會看到220nm下的基線有點往下漂的,但是只要254nm下正常即可;
如果是MS的檢測器,依儀器型號,響應在5次方到6次方都是正常的!
4、NaOH溶液幾乎沒有用過!一般柱子的耐酸能力比耐堿強!
看柱子的說明書,一般范圍是2-9的柱子就屬于較寬范圍了!堿性藥物你進樣量少的話,對柱子也不會有太大影響!主要是流動相的影響!
建議先將預柱取下看看,如果壓力下降可能是預柱的問題,一般情況下如果加了預柱,色譜柱不會堵塞
1、柱子有沒有堵還不好說,因為不同的設備具體壓力也不一樣。壓力是純乙腈<純甲醇<10%甲醇水溶液的。
2、關于反沖柱子,色譜柱一般都是有注明方向的,反向沖洗是會影響柱子使用壽命的。不過不同廠家的產品之間存在差異,好的柱子,不建議反向沖洗。最好咨詢廠家后再作處理。
3、LZ用的是紫外-可見光分光光度計嗎?這個設備在使用時必須有一個預熱過程,否則它也會造成基線漂移。如果分光光度計沒問題且柱子平衡了很長時間后,基線仍有漂移,那很可能是柱溫沒控制好。
4、柱子是絕對不可以用NaOH溶液沖的,ph的話,一般是2-8吧,堿性太強會把柱子上的硅膠都溶掉。如果你是用強堿性溶液溶解樣品進的樣,那是可能造成出峰太快的。建議使用流動相溶解樣品(或者洗脫強度比流動相小的有機溶劑水溶液),這樣也可以減少樣品在柱子中造成堵塞的幾率。
PS:lz可以看看一些企業(yè)(島津、waters、安捷倫)的學員手冊,網上很多。里面有比較系統(tǒng)的講解,對剛剛開始接觸HPLC的人還是很有幫助的,
首先看看你這個柱子使用多長時間了,一般使用時間長的柱子柱壓都會比新的高,你要是有新的柱子可以用上試試,看看柱壓是不是正常的,如果還是不正常的話你可以看看是不是在線過濾器堵了,或者是管路哪堵了,如果還不行,你可以把圖發(fā)給我,我看能不能幫到你。