升高退火溫度
增加退火時間
增加延伸時間
少用引物
少用模板
少用酶
這是常用的方法，本人前些時做這個，不出目標帶，但是出現(xiàn)比目標帶少100bp的帶，另一個基因已經(jīng)p出來了，所以試劑沒問題，于是采取增加延伸時間，結(jié)果多跑出來一條比目標帶大300bp的帶，現(xiàn)在準備繼續(xù)探索，希望可以繼續(xù)交流

最好附張圖片！
1.其他PCR組分不換，單獨換新的ddH2O作為陰性模板試試。一般陰性的話都是懷疑陰性模板污染。如果換水后仍是由雜帶，再考慮換套新的PVR組分，考慮是否是PCR的酶，dNTPs，Buffer污染等。
2.是否是引物設(shè)計有問題/造成非特異性擴增呢？如果是的話就重新設(shè)計引物吧，很便宜的。
3.第三，你可以把目的條帶切割下來，回收后用作模板，二次擴增，這樣如果是非特異性擴增的話基本可以去除。
簡單給幾點建議，希望對你能有多幫助，如有問題，可以繼續(xù)討論！