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自然_法則銀蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
PCR出現(xiàn)假陰性的對(duì)策
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| 蟲(chóng)子最近在做PCR，目的條帶出現(xiàn)了，而且效果也比較理想，退火溫度已經(jīng)很高了，但仍然還有假陰性存在，離目的條帶很近豐度很低，此外無(wú)其他雜帶。問(wèn)下大師們有沒(méi)有治理假陰性的良方，謝謝 |
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水牛默默
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【答案】應(yīng)助回帖
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自然_法則: 金幣+6, 博學(xué)EPI+1, ★★★很有幫助 2012-10-08 18:46:38
自然_法則: 金幣+6, 博學(xué)EPI+1, ★★★很有幫助 2012-10-08 18:46:38
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最好附張圖片！ 1.其他PCR組分不換，單獨(dú)換新的ddH2O作為陰性模板試試。一般陰性的話(huà)都是懷疑陰性模板污染。如果換水后仍是由雜帶，再考慮換套新的PVR組分，考慮是否是PCR的酶，dNTPs，Buffer污染等。 2.是否是引物設(shè)計(jì)有問(wèn)題/造成非特異性擴(kuò)增呢？如果是的話(huà)就重新設(shè)計(jì)引物吧，很便宜的。 3.第三，你可以把目的條帶切割下來(lái)，回收后用作模板，二次擴(kuò)增，這樣如果是非特異性擴(kuò)增的話(huà)基本可以去除。 簡(jiǎn)單給幾點(diǎn)建議，希望對(duì)你能有多幫助，如有問(wèn)題，可以繼續(xù)討論！ |
3樓2012-10-05 23:49:51
指上阡陌
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2樓2012-10-05 18:49:09
自然_法則
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4樓2012-10-08 18:45:47
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