適配體 aptamer 與分析物相互作用相關(guān)
適配體aptamer 如何能有效的與分析物結(jié)合，例如VEGF165與VEGF165 aptamer 有效結(jié)合需要注意哪些條件？比如溫度，ph，離子強(qiáng)度， 這與抗體與抗原的相互作用有什么主要區(qū)別？
如何讓適配體高效結(jié)合分析物呢？
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號(hào)
aptamer與靶標(biāo)的結(jié)合條件，主要取決于aptamer的篩選條件。對(duì)于一些用得比較多的aptamer，有不少參考文獻(xiàn)。當(dāng)然，現(xiàn)在有的文獻(xiàn)比較水，要注意雜志的檔次和文章的作者。
抗原-抗體的結(jié)合有前帶后帶的說(shuō)法，aptamer似乎沒(méi)有。
aptamer與靶標(biāo)的結(jié)合，與aptamer是否被固定有關(guān)。固定化的aptamer，一定要注意手臂的設(shè)計(jì)。
很感謝，aptamer 與分析物結(jié)合前是不是一定要activation或是退火？還有注意離子強(qiáng)度，溫度？ph值起什么作用呢？ 多謝指點(diǎn)。固定化的aptamer 手臂是什么意思？是要加6個(gè)C嗎
，
個(gè)人感覺(jué)固定化的aptamer的手臂是為了降低位阻。。。aptamer在使用前變性是為了aptamer呈現(xiàn)鏈狀而不是相互糾纏在一起。也可以說(shuō)是為了增加aptamer與target的識(shí)別機(jī)會(huì)。至于離子強(qiáng)度，溫度和pH值在一定程度上會(huì)影響aptamer的選擇性和靈敏度，這個(gè)要靠實(shí)驗(yàn)優(yōu)化，或者參考權(quán)威文獻(xiàn)，個(gè)人覺(jué)得一般情況下和篩選這種aptamer的條件是類(lèi)似的。
希望大家廣泛留言提供寶貴意見(jiàn)，初次研究適配體與分析物相互作用，但就是抓不到，具體點(diǎn)正在用ATP的aptamer 捕獲ATP，但是不知道哪個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)有問(wèn)題，就是抓不到ATP！還請(qǐng)高手指點(diǎn)
實(shí)驗(yàn)體系的設(shè)計(jì)不同，條件有一些差別。某些文獻(xiàn)的條件是不可信的。你是固定化檢測(cè)，還是在均相檢測(cè)？如果不擔(dān)心泄密，可給出一些具體設(shè)計(jì)，這樣能更有針對(duì)性。
固定在表面上進(jìn)行檢測(cè)，比如說(shuō)我用 VEGF165 的 aptamer去抓 VEGF，很常見(jiàn)的一個(gè)反應(yīng)，aptamer 抓分析物最主要的是什么？
適配體aptamer 與分析物有效結(jié)合的有效結(jié)合取決于它們之間本身的親和性（例如解離常數(shù)或結(jié)合常數(shù)）；以及所用的buffer 種類(lèi) pH 鹽離子濃度等外部條件。
親和性可以通過(guò)文獻(xiàn)所報(bào)道的獲得，像ATP與其DNA aptamer解離常數(shù)在微摩爾級(jí)，所以要想觀察到明顯的結(jié)合，ATP需要在毫摩爾級(jí)的濃度。VEGF與aptamer親和性在100納摩爾左右，VEGF的濃度可能要到微摩爾級(jí)了。此外，VEGF是蛋白質(zhì)，需要防止其變性。
實(shí)驗(yàn)緩沖條件可以參考其原始文獻(xiàn)，即樓上所提到的篩選條件。
如果aptamer是固定在表面上，可能還會(huì)在很大程度上減弱其與分析物的親和性。影響的減弱在于連接臂的設(shè)計(jì)、在表面固定的密度等。