色譜柱柱壓異常高，嘗試了多種辦法，請(qǐng)教高人
柱子型號(hào)：Jupiter C4 reversed phase column (250 mm × 4.6 mm, 300 -sized pores, 5-μm sized particles)
進(jìn)樣：植物蛋白粗提液，過(guò)0.45膜
流動(dòng)相：70%水30%乙腈，結(jié)束試驗(yàn)后用100%乙腈沖洗
問(wèn)題：用了兩三天后，柱壓奇高，達(dá)到220左右，用100%乙腈沖洗，柱壓正常，在45-48之間
采取措施：超聲篩板，無(wú)用；反相沖洗，無(wú)用；低流速5%甲醇沖洗兩天后，采用流動(dòng)相仍在190左右
所以，在此請(qǐng)高人指點(diǎn)，如果操作，為什么100%乙腈沖洗時(shí)正常，柱子真得堵了嗎？
附件是我在網(wǎng)上搜集的液相色譜柱的清洗與再生方法，感謝大家，在此分享[ Last edited by hsd3521 on 2013-3-26 at 07:53 ]
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號(hào)
讓我猜一下，沒(méi)測(cè)過(guò)蛋白，但可能是如下原因：
1.你所分析的蛋白，在乙腈中溶解性好，但在水中，可能會(huì)析出，在你現(xiàn)在的色譜條件下，使用時(shí)間長(zhǎng)，肯定會(huì)堵柱。
建議接一個(gè)保護(hù)柱。
測(cè)試你的樣品的溶解性，溶于水嗎？
柱壓高？真是柱的原因嗎？取下柱子，看看柱壓。
再說(shuō)低流速的甲醇水，5% 也有點(diǎn)太低了吧？雖然你的柱可以用水沖，但還是有機(jī)相比例高些好點(diǎn)吧...
可以一個(gè)個(gè)模塊拆，排除看看是連上哪個(gè)模塊壓力大。如果柱溫箱柱子前接口不連接，壓力正常，連上柱子（柱后未連未連接檢測(cè)器）壓力就大了這樣就是柱子問(wèn)題了 。
乙腈壓縮系數(shù)小，純乙腈當(dāng)然壓力小了，你比前后的壓力應(yīng)該是一個(gè)流動(dòng)相比列，100%水和100%乙腈差別當(dāng)然大了
一般已經(jīng)過(guò)了0.45的膜了就不應(yīng)該是樣品堵了柱子，但是如果用這個(gè)比例洗脫一直有問(wèn)題的話(huà)可以考慮換一下比例，還有，我認(rèn)為你檢查一下是不是有人用它做過(guò)別的，他們是不是有殘留，我就遇到過(guò)在檢測(cè)池那里出現(xiàn)殘留的問(wèn)題，用水就導(dǎo)致壓力增高，換成郵寄溶劑壓力就會(huì)正常，另外，你的壓力單位是什么？
還有，如果壓力還在正常范圍內(nèi)就不要太擔(dān)心，能用就行唄。
柱子倒過(guò)來(lái)裝著沖下試試。
感謝您的回復(fù)，我是豆類(lèi)蛋白粗提液，基本全是水溶體系
取下柱子，就沒(méi)柱壓了，最高在5左右
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