提取方法中采用蛋白酶K溫育,10~60min都已嘗試,且酶量為40微的10mg/ml,實驗中采用磁球進行DNA吸附,洗脫,電泳。電泳圖很干凈,確定是基因組。但用K5500測得比值偏低,同時A260/230比值低于1.求諸位大神指導。 返回小木蟲查看更多
A260/280低說明有蛋白雜質污染。蛋白酶K作用不是除蛋白,是去掉核酸酶活性的。實在不行的話,用酚氯仿抽提后再吸附。A260/230低是因為有有機試劑污染,可能是洗滌時的酒精殘余?梢宰尵凭珦]發(fā)一會后再洗脫。
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A260/280低說明有蛋白雜質污染。蛋白酶K作用不是除蛋白,是去掉核酸酶活性的。實在不行的話,用酚氯仿抽提后再吸附。A260/230低是因為有有機試劑污染,可能是洗滌時的酒精殘余?梢宰尵凭珦]發(fā)一會后再洗脫。
現在情況是這樣的,我在做一種提基因組的方法研究,目的就是不用酚氯仿,如果調解pH或是溫度什么的可以去蛋白么?還有,關于70%乙醇的,揮發(fā)半個小時也試過,在測K5500也是放置很久后才測得,這樣的時間乙醇依然揮發(fā)不盡?
用吸附的方法一般蛋白不會很多,但是有些蛋白與核酸形成復合物,用CTAB法對解離核酸蛋白復合物有一定幫助,用溫度、pH之類的方法除蛋白沒有聽說過。酚氯仿主要可以一定程度上變性蛋白,并從核酸上解離下來,是常用的除去核酸樣品中蛋白的方法。
至于你的乙醇揮發(fā)不干凈的問題,一般不會,通常離心后再放置幾分鐘就可以了
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A260/230值偏低,有時會是小分子如氨基酸、多肽類的影響,如果不是乙醇的影響是此類的么?