與PMD-19T連接問(wèn)題
用PMD-19T載體與我的目的基因片段（3.3kb）鏈接，之前用高保真酶進(jìn)行PCR擴(kuò)增后通過(guò)加A試劑盒進(jìn)行加A尾，之后熱擊轉(zhuǎn)化，涂布后長(zhǎng)出菌落，但是提質(zhì)粒鑒定后發(fā)現(xiàn)載體自連（單雙酶切條帶一樣，只有一條，有一個(gè)不一樣的，但單切有出現(xiàn)兩條條帶）；后來(lái)用一步克隆試劑盒進(jìn)行連接，但涂布后沒(méi)有菌落，一直不知道是什么原因，請(qǐng)高人指教···
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號(hào)
可以降低假陽(yáng)性的概率，lucky to you
你是說(shuō)可能是載體的問(wèn)題嗎
，
我也是氨芐平板篩的···
ok
19T 自連 很正常，他質(zhì)量 沒(méi)那么好，建議4℃ 過(guò)夜，增加連接效率