大家好！我是博士新手，之前沒有做過分子生物，碩士做過最深的就是DGGE。本科又是化學(xué)師范專業(yè)，生物分子基礎(chǔ)幾乎沒有。現(xiàn)在要研究一個目的基因在兩個品種之間的表達差異。需要對植物內(nèi)的這個基因進行cDNA全長克隆。
目前有目的基因的一段轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果，打算用Clontech的SMARTer RACE試劑盒。試劑盒說明書看了，也在網(wǎng)頁上搜了一些資料，但GSP引物怎么設(shè)計還是一頭霧水。  不知道轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果中的基因堿基序列的順序就是按照5'到3'的順序來排的嗎？
之前通過自己努力，做了熒光定量PCR，用Primer 5.0 軟件設(shè)計跨內(nèi)含子引物成功了！但這個GSP引物設(shè)計是真的做不來�。。�！絕望中。。。。。
希望做過的大牛提供幫助。
PS：轉(zhuǎn)錄組序列我已經(jīng)在NCBI上進行過比對，找到了相似基因，99%相似度。相似基因大約1Kb對點。附件為試劑盒說明書。

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