請(qǐng)教一個(gè)關(guān)于ELISA出現(xiàn)假陽性的問題
本人新手,做ELISA發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)假陽性,那如果設(shè)置空白對(duì)照,是否可以通過減去空白對(duì)照的值得到真實(shí)的結(jié)果?
舉例:
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模弘p抗夾心法測(cè)抗原濃度
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
實(shí)驗(yàn)組:包被捕獲抗體-抗原-酶標(biāo)抗體 OD450=1.2
空白對(duì)照1:無包被蛋白-抗原-酶標(biāo)抗體 OD450=0.4
空白對(duì)照2:包被捕獲抗體-無抗原-酶標(biāo)抗體 OD450=0.3
包被捕獲抗體-抗原-酶標(biāo)抗體的實(shí)際吸光值為=1.2-0.4-0.3=0.5
請(qǐng)問可以通過這樣的數(shù)據(jù)處理排除高背景對(duì)真實(shí)結(jié)果的影響,從而證明真實(shí)的吸光度是0.5嗎?如果不可以的話,原因是什么?@wizardfan
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號(hào)
根據(jù)自己理解實(shí)驗(yàn)組真實(shí)吸光度為:1.2-0.3=0.9 即平行對(duì)照是空白對(duì)照2;空白對(duì)照1不合理,不需要。 如果已知抗原濃度,可以倍比稀釋成多個(gè)濃度,作個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線,然后根據(jù)曲線可測(cè)抗原的未知濃度。如果待測(cè)抗原濃度太高,超過線性范圍,可以在測(cè)定稀釋后的濃度,再乘回去稀釋倍數(shù)。
為什么空白對(duì)照1不合理呢
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