重組質(zhì)粒經(jīng)誘導(dǎo)劑表達(dá)后是不是就會(huì)持續(xù)表達(dá)？
有一個(gè)基因缺失型工程菌，需要轉(zhuǎn)入外源基因表達(dá)，想問下，質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)進(jìn)去的菌株經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后是不是就會(huì)持續(xù)表達(dá)。后面幾次培養(yǎng)不加誘導(dǎo)劑是不是也會(huì)生長(zhǎng)？
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不是這樣的，我不太清楚你后幾次培養(yǎng)是什么操作，轉(zhuǎn)接新的培養(yǎng)基或者新的平板還是要加誘導(dǎo)劑，誘導(dǎo)劑不會(huì)隨著菌株永遠(yuǎn)存在的，何況誘導(dǎo)劑和調(diào)控蛋白的結(jié)合與解離本就是一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡。
謝謝回復(fù)。我這邊就是質(zhì)粒轉(zhuǎn)進(jìn)去后，需要加阿拉伯糖誘導(dǎo)表達(dá)，然后菌種可以生長(zhǎng)，正常不加的話，基因不表達(dá)，菌種是不生長(zhǎng)的。剛轉(zhuǎn)進(jìn)去后，是只有加了誘導(dǎo)劑后才生長(zhǎng)，可后面培養(yǎng)了幾次發(fā)現(xiàn)不加阿拉伯糖也能生長(zhǎng)。就是疑問是不是在誘導(dǎo)劑的板子上經(jīng)誘導(dǎo)后就能持續(xù)表達(dá)了。問過一個(gè)師兄，他說這種情況是提前誘導(dǎo)了，需要讓誘導(dǎo)消失，才能重新進(jìn)行后續(xù)的誘導(dǎo)表達(dá)實(shí)驗(yàn)，否則實(shí)驗(yàn)不準(zhǔn)確。就是不清楚怎么才能讓給誘導(dǎo)消失，還是最好重新轉(zhuǎn)化一次
，
啟動(dòng)子是阿拉伯糖操縱子，調(diào)控不嚴(yán)格，有滲漏表達(dá)
阿拉伯糖啟動(dòng)子的滲漏相對(duì)已經(jīng)很低了，滲漏是否足以支持菌株生長(zhǎng)，試一下就知道。另外，你后面培養(yǎng)不誘導(dǎo)也能生長(zhǎng)可能是你誘導(dǎo)的那個(gè)蛋白半衰期較長(zhǎng)，已經(jīng)表達(dá)的蛋白還能存在很長(zhǎng)時(shí)間，如果是這種情況，某些情況下會(huì)考慮在該蛋白后面加上降解標(biāo)簽。這都是我個(gè)人見解，僅供參考。
謝謝�，F(xiàn)在只想知道這個(gè)重組菌是不是沒用了，因?yàn)楹竺嬉龅氖堑鞍卓剐院Y選，這種持續(xù)表達(dá)不是很難做后續(xù)了嗎。還有想請(qǐng)問下降解標(biāo)簽一般有哪些。
我也感覺是有本底表達(dá)，而且表達(dá)量還挺高，現(xiàn)在我這個(gè)重組菌在純amp的板子上長(zhǎng)的跟加了阿拉伯糖生長(zhǎng)差不多了。理論上純amp的板子應(yīng)該是不長(zhǎng)的，現(xiàn)在有點(diǎn)慌，不知道該怎么弄了。
大腸桿菌中常用的降解標(biāo)簽有LAA和ssrA，也有研究者對(duì)這些tag的氨基酸進(jìn)行不同程度改變，衍生出一系列降解特性各有差異的tag。