RNA濃度調(diào)整一致
將不同處理方式的樣本RNA濃度調(diào)整一致,然后進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄和熒光定量PCR,不明白的是如果RNA的濃度調(diào)整一致,那Ct值應(yīng)該也是相同的吧,那這樣的話,濃度調(diào)整一致的意義是什么呢?
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將不同處理方式的樣本RNA濃度調(diào)整一致,然后進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄和熒光定量PCR,不明白的是如果RNA的濃度調(diào)整一致,那Ct值應(yīng)該也是相同的吧,那這樣的話,濃度調(diào)整一致的意義是什么呢?
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濃度一致,表明對(duì)照樣和處理樣的樣本數(shù)量是一樣的,這樣才有可比性,保證內(nèi)參基因的CT值是一樣的,但不同處理會(huì)影響目的基因的表達(dá),導(dǎo)致CT值出現(xiàn)差異,然后根據(jù)公式計(jì)算相對(duì)表達(dá)量
將rna量調(diào)整成一樣類似于western blot中你上樣相同總量的蛋白,但是你感興趣的蛋白在不同處理下表達(dá)量是不一樣的。一樣的,你的處理如果對(duì)目標(biāo)基因mrna有影響,ct值又怎么會(huì)一樣呢?
總量一致,內(nèi)容物不一致,也就是潛在的模板不一樣。所以通過ct值來反應(yīng)表達(dá)量
RNA濃度相同,即總量一致,若Ct值是不相同的,那是不是可以理解為相同總量RNA的目的基因的拷貝數(shù)不一樣。那這樣的話,RNA總量一致,拷貝數(shù)不相同的情況是由于片段長(zhǎng)度不一致嗎?可是提取過程是一樣的,怎么會(huì)導(dǎo)致片段長(zhǎng)度不相同呢?剛剛接觸這塊,請(qǐng)多多指教
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RNA濃度相同,即總量一致,若Ct值是不相同的,那是不是可以理解為相同總量RNA的目的基因的拷貝數(shù)不一樣。那這樣的話,RNA總量一致,拷貝數(shù)不相同的情況是由于片段長(zhǎng)度不一致嗎?可是提取過程是一樣的,怎么會(huì)導(dǎo)致片段長(zhǎng)度不相同呢?剛剛接觸這塊,請(qǐng)多多指教