構(gòu)建突變文庫，所用超級感受態(tài)的制備
用實(shí)驗(yàn)室自制的氯化鈣法感受態(tài)來構(gòu)突變庫，長菌量不太理想。經(jīng)費(fèi)原因，只能自己做感受態(tài)，看網(wǎng)上常見的Inoue法制備超級感受態(tài)似乎不適合BL21啊。
有沒有人好心人分享一下適合做BL21超級感受態(tài)的protocol 先在此謝過啦
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jm109我做過，效果不比公司差，只是保存時(shí)間沒公司那么長
第一，建庫一般使用電轉(zhuǎn)感受態(tài)，電轉(zhuǎn)感受態(tài)制作很簡單，菌液OD長到0.6后預(yù)冷，使用預(yù)冷的去離子水洗三遍就行了；第二，BL21（DE3）轉(zhuǎn)化效率本身就不高，如果庫容量到幾十上百萬，建議先轉(zhuǎn)MC1061等菌株，刮板提取質(zhì)粒后再轉(zhuǎn)入BL21（DE3）進(jìn)行篩眩?/p>