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本人最近在做同源重組連接，將2-3個片段連接到載體上。
連接酶用的是擎科sosoo同源重組連接酶；載體用的是pBI121載體，長度14758bp。
插入的片段大小1100bp左右；酶切位點用的BamH I單酶切，同源臂是擎科的技術(shù)給我設(shè)計的應(yīng)該沒問題。
載體用TAKARA的快切酶，確認(rèn)酶切開。
連接時摩爾比按兩種形式進(jìn)行計算。1載體：片段=1:10；2載體：總片段=1:10(即插入兩個片段時摩爾比為1:5:5；插入三個片段時摩爾比為1:3:3:3)。
熱激法轉(zhuǎn)入感受態(tài)，涂板過夜培養(yǎng)12-16h。第二天版上有長菌，但是挑出來的菌都搖不起來，不知是什么原因。
做過pBI121空載的對照，證明感受態(tài)，平板以及含抗生素的LB液體都沒問題。也排除噬菌體干擾。
有懷疑過是不是因為載體太長的緣故，但還是不太明白明明版上的菌長得很好，為什么搖不起來。按理說同源重組應(yīng)該長出來的都是陽性菌株，跪求大神解惑。 返回小木蟲查看更多