為什么pk18sacB質(zhì)粒連接同源片段后轉(zhuǎn)化大腸難以獲得轉(zhuǎn)化子
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號(hào)
樓主給出的信息也太少了吧
這個(gè)質(zhì)粒用來(lái)敲除，需要先連接上敲除靶基因的上下游同源臂。將pk18酶切或者環(huán)p線性化后用Gibson連接這兩個(gè)同源臂，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌要么得到的轉(zhuǎn)化子只有幾個(gè)，要么一個(gè)也沒(méi)有。沒(méi)想明白原因。
轉(zhuǎn)化子做過(guò)驗(yàn)證嗎？里面有沒(méi)有質(zhì)粒和目的基因？
轉(zhuǎn)化方法是什么呢
，
偶爾長(zhǎng)出的幾個(gè)轉(zhuǎn)化子提質(zhì)粒測(cè)序是對(duì)的。用的是熱激轉(zhuǎn)化。應(yīng)該是這個(gè)質(zhì)粒骨架導(dǎo)致獲得的轉(zhuǎn)化子少，將sacB基因連到別的載體骨架轉(zhuǎn)化非常正常。
您好，可否提供一下質(zhì)粒.謝謝