植物基因敲低表達(dá)，用CRISPR還是用RNAi？
最近想要做植物內(nèi)某個(gè)基因的沉默，一直糾結(jié)于用Crispr，還是用傳統(tǒng)的RNAi技術(shù)，我的目的想要看該基因敲低后的相關(guān)生理狀態(tài)，并不一定非要敲除，擔(dān)心徹底敲除某個(gè)基因會(huì)引起其他生理反應(yīng)，而不是我預(yù)期的生理現(xiàn)象。因此，想求教各位大神，這兩個(gè)技術(shù)手段的優(yōu)缺點(diǎn)，針對(duì)我的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模袥](méi)有大神可以給點(diǎn)建議？謝謝！
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號(hào)
1：研究對(duì)象是擬南芥？是單子葉植物還是雙子葉植物？載體不同侵染物種不同，但無(wú)論是什么植物基本上CRISPR都需要構(gòu)建雙元載體，U6啟動(dòng)子的中間載體，及連接Cas9的表達(dá)載體（pYAO-AtU6-Cas9侵染擬南芥，而pCA1300-OsU6-Cas9適合水稻）
2：理論上講Cas9會(huì)切割基因組DNA雙鏈，再設(shè)計(jì)sgRNA靶點(diǎn)NGG，的N位點(diǎn)，DNA利用修復(fù)產(chǎn)生錯(cuò)配，造成替換，串碼，提前終止，再侵染完成后的T1代就能拿到純合株系！注意，此時(shí)的純合株系里含有Cas9融合蛋白，需于野生型雜交將Cas9分離篩掉
3: 若是你的基因功能在植物生長(zhǎng)發(fā)育階段起到了重要功能，若是缺失了，肯定會(huì)有表型的（包括雜合）
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還是crispr吧，干擾已經(jīng)不行了