鏈置換反應(yīng)不能發(fā)生
最近在做DNA鏈置換方面的實(shí)驗(yàn),反應(yīng)在PBS中進(jìn)行,其中鏈A、T、B的濃度試了兩組,10nM、1nM、5nM一組,50nM、1nM、25nM一組。鏈A和鏈T結(jié)合,鏈B可以與鏈A結(jié)合從而將鏈T置換下來(lái),從而鏈T能夠繼續(xù)參與反應(yīng),實(shí)現(xiàn)鏈T量的放大。但是實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)沒(méi)有出現(xiàn)信號(hào)放大,求助各位大佬,可以從哪些方面嘗試一下。(鏈A是分子信標(biāo),鏈T是靶標(biāo),鏈B理論上可以將靶標(biāo)置換下來(lái),從反應(yīng)結(jié)果看,鏈A和鏈T能夠反應(yīng),鏈A和鏈B也能反應(yīng))
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號(hào)
加熱再冷卻
字?jǐn)?shù)補(bǔ)丁
請(qǐng)問(wèn)“加熱再冷卻”可以說(shuō)的詳細(xì)一點(diǎn)嗎?具體是哪個(gè)步驟
混合后測(cè)信號(hào)前加熱到95然后冷卻到室溫
剛剛注意到你的a是過(guò)量的,應(yīng)該保證b的當(dāng)量是過(guò)量的
核酸擴(kuò)增的buffer是PBS,這個(gè)不常用吧,Mg(II)濃度會(huì)受影響么?離子濃度會(huì)不會(huì)高了?
請(qǐng)問(wèn)建議用什么緩沖溶液呀
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好的 感謝
Tris, Hepes一般用的比較多,PBS用來(lái)做擴(kuò)增反應(yīng)不多見(jiàn)。