求助各位大佬，本人在做分子信標(biāo)識(shí)別（MB）和信號(hào)放大方面的工作，T是靶標(biāo)核酸鏈，B是理論上能將與MB結(jié)合的T替換下來(lái)，游離的T再次與MB反應(yīng)，以實(shí)現(xiàn)T的量放大的效果。具體步驟如下：
1、MB探針溶于緩沖溶液（10mM Tris-HCl，2mM EDTA，5mM MgCl2），95℃加熱5min，緩慢冷卻至4℃，得到發(fā)夾狀MB。B直接溶于緩沖溶液備用（10mM Tris-HCl，2mM EDTA）。
2、取MB于PBS溶液中，37℃孵育30min。測(cè)定熒光強(qiáng)度記作F0。
3、取MB和T適量于PBS溶液中，37℃孵育30min。測(cè)定熒光強(qiáng)度記作F1。
4、取MB和B適量于PBS溶液中，37℃孵育30min。測(cè)定熒光強(qiáng)度記作F2。
5、取MB和T適量于PBS溶液中，37℃孵育30min。取出，加入B探針，37℃孵育30min。測(cè)定熒光強(qiáng)度記作F3。
以上反應(yīng)，MB:T:B為10：1：5。
結(jié)果發(fā)現(xiàn)熒光強(qiáng)度F0<F1<F2≈F3，理論上F3是明顯大于F2的，不知為何，檢測(cè)到的信號(hào)強(qiáng)度沒(méi)有明顯提高。目前推測(cè)是鏈B沒(méi)有將T置換以致F2與F3相近，不知各位大佬有無(wú)別的看法，或者具體一些的建議？ 返回小木蟲(chóng)查看更多