酶容易降低酶活怎么辦?
用大腸桿菌表達(dá)胞內(nèi)酶,每次都是從-80℃劃線后再培養(yǎng)的,但發(fā)現(xiàn)前幾次實(shí)驗(yàn)酶活還可以,后面重復(fù)的時(shí)候發(fā)現(xiàn)酶活降低了很多,培養(yǎng)條件都是一樣的……很是惆悵……
有大佬了解是什么原因嗎?還有,大腸桿菌菌體如果放冰上過(guò)夜再破壁的話,會(huì)對(duì)酶活有影響嗎?
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用大腸桿菌表達(dá)胞內(nèi)酶,每次都是從-80℃劃線后再培養(yǎng)的,但發(fā)現(xiàn)前幾次實(shí)驗(yàn)酶活還可以,后面重復(fù)的時(shí)候發(fā)現(xiàn)酶活降低了很多,培養(yǎng)條件都是一樣的……很是惆悵……
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1
感謝回復(fù),是把菌體離心放冰上的
請(qǐng)問(wèn)這個(gè)菌液的表達(dá)水平要怎么定量呢?是通過(guò)蛋白濃度定量嗎
,
WB定量菌液破碎后的上清。
當(dāng)然有的時(shí)候誘導(dǎo)表達(dá)的條帶在總可溶蛋白中非常明顯,可以跑一個(gè)總可溶蛋白的考馬斯藍(lán)染色就夠了。
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