求助帖:質(zhì)粒提取搖菌失敗求助
新手第一次做質(zhì)粒轉(zhuǎn)化,挑菌、提取,做的是PNL-4-3這個(gè)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化使用熱激法,質(zhì)粒+感受態(tài)細(xì)胞stbl3結(jié)合冰浴30min,熱激90s,在冰浴2min,加1ml的無(wú)抗LB培養(yǎng)基,搖1h,取10ml菌液鋪固體培養(yǎng)基,雖然長(zhǎng)菌挺密,但可挑出單菌落,然后10ml有抗培養(yǎng)基搖菌,搖了20管,過(guò)夜搖菌,渾濁了,然后用天根大抽提試劑盒,富集了將近200ml的菌體,嚴(yán)格按照說(shuō)明書做,但最后提取出的質(zhì)粒濃度不到50ng/ul,純度OD260/280大于2,為什么呢?希望各位蟲友解答一下,感謝
返回小木蟲查看更多
今日熱帖
京公網(wǎng)安備 11010802022153號(hào)
那搖菌的時(shí)候用拿封口膜或保鮮膜把試管或錐形瓶的口封上嗎
,
Stbl3是用來(lái)表達(dá)的,不是用來(lái)擴(kuò)增質(zhì)粒的,質(zhì)?截悜(yīng)該不多;另外你的質(zhì)粒是不是高拷貝質(zhì)粒?再加上提質(zhì)粒操作問(wèn)題就這樣。
有可能壓根就沒(méi)搖出來(lái)……