求助帖：質(zhì)粒提取搖菌失敗求助
新手第一次做質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，挑菌、提取，做的是PNL-4-3這個質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化使用熱激法，質(zhì)粒+感受態(tài)細胞stbl3結(jié)合冰浴30min,熱激90s，在冰浴2min，加1ml的無抗LB培養(yǎng)基，搖1h，取10ml菌液鋪固體培養(yǎng)基，雖然長菌挺密，但可挑出單菌落，然后10ml有抗培養(yǎng)基搖菌，搖了20管，過夜搖菌，渾濁了，然后用天根大抽提試劑盒，富集了將近200ml的菌體，嚴格按照說明書做，但最后提取出的質(zhì)粒濃度不到50ng/ul，純度OD260/280大于2，為什么呢？希望各位蟲友解答一下，感謝
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號
菌液搖的不夠渾，試管搖不開，用錐形瓶
挑克隆后先用5毫升搖菌，保種一毫升。剩下的四毫升提取質(zhì)粒電泳鑒定。不要一來就大抽。小的證明沒問題再大抽。
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還有涂平板，如果是質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，涂100-200微升菌夜就夠了。你10毫升怎么涂的？
同意某樓，1mL LB復蘇培養(yǎng)后離心棄900微升，剩余的重懸菌體沉淀涂板，你的為什么是10mL