連接轉(zhuǎn)化的時(shí)候，去磷酸化吧什么都不長(zhǎng)，不去磷酸化吧長(zhǎng)不少全自連
連接轉(zhuǎn)化的時(shí)候，質(zhì)粒酶切后，去磷酸化吧什么都不長(zhǎng)，不去磷酸化吧長(zhǎng)不少全自連。
做了3多個(gè)月了，都是這個(gè)結(jié)果。所有試劑材料都排除過(guò)，沒(méi)有問(wèn)題。
請(qǐng)問(wèn)大俠們有沒(méi)有好建議�。。。�！
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不一定非要單酶切吧
為何不考慮雙妹切連接
和老板提過(guò)了，她就說(shuō)她做了那么多年吧啦吧啦的，超無(wú)奈
，
說(shuō)明你酶切有問(wèn)題啊，去磷酸后不自連，不去磷酸化自連，說(shuō)明你沒(méi)有切完全，就是有單酶切在里邊，另一個(gè)酶沒(méi)切開(kāi)，你是那兩個(gè)酶，如果共用Buffer有個(gè)效率低的，我建議你先單酶切他，然后回收后在切另一個(gè)酶，根本不需要去磷酸化，轉(zhuǎn)化沒(méi)問(wèn)題，前提要保證片段也酶切好了。
要不先不加酶將載體與片段50度孵育20分鐘，冷卻下來(lái)后加酶連接