關(guān)于蛋白質(zhì)的分離純化
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蛋白質(zhì)的分離純化是生物化學技術(shù)中的重要內(nèi)容,在科研和生產(chǎn)中都有重要作用。蛋白質(zhì)純化的流程大致包括選材及預處理、細胞破碎及抽提、初步提取和精制純化等部分,根據(jù)具體的純化目的和要求可以有所不同。

選材的主要原則是原料易得,蛋白含量高,最好便于純化。蛋白質(zhì)的主要來源包括動物、植物和微生物。由于種屬差異及培養(yǎng)條件和時間的差別,其蛋白含量可相差很大,提取難度也完全不同。
一般植物細胞含纖維素,堅韌,不易破碎,且多含酚類物質(zhì),易氧化產(chǎn)生有色物質(zhì),難以除去。其液泡中又常含有酸性代謝物,會改變?nèi)芤旱膒H。微生物因為容易培養(yǎng)而較為常用,但也需要破碎細胞壁。動物細胞沒有細胞壁,相對容易處理,但往往成本較高。

選定材料之后,一般都需要進行簡單的預處理,快速去除不需要的部分,以利于蛋白質(zhì)的提取操作。常見的預處理包括植物種子去殼、脫脂,葉片清洗、去除干枯壞死組織;動物組織清洗血污,去除皮毛、脂肪、神經(jīng)、血管;微生物發(fā)酵液細胞分離和絮凝等。

如目的蛋白在細胞內(nèi),需要進行細胞破碎,使蛋白釋放出來。動物細胞可用細胞破碎機、勻漿器、、超聲波、丙酮干粉等方法破碎。植物可用石英砂研磨或纖維素酶處理。微生物的細胞壁是一個大分子,破碎較難。有超聲振蕩、研磨、高壓、溶菌酶、細胞自溶等方法。
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細胞破碎現(xiàn)在都用高壓細胞破碎機了,效果比其他方法好很多,完全可以替代超聲,省時省力,推薦大家使用
求推薦性價比高使用效果好的高壓細胞破碎機~
如果目的蛋白定位在細胞核或某個細胞器中,一般還要通過差速離心等方法分離細胞核或相應細胞器。這樣可以減少很多雜蛋白,有助于后續(xù)純化。
請教一下所謂雜蛋白是不是就是目標蛋白以外的蛋白
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