求助，畢赤酵母系統(tǒng)表達(dá)阿魏酸酯酶，蛋白沒(méi)有活性，可能哪些問(wèn)題，該怎么解決現(xiàn)狀？
本人初入分子生物，用PPIZCA質(zhì)粒重組了阿魏酸酯酶的基因序列，然后我把重組質(zhì)粒導(dǎo)入畢赤酵母中。結(jié)果是，PCR和測(cè)序驗(yàn)證基因大小和序列沒(méi)問(wèn)題，western blot也做了能看到所在處清晰的條帶，但是有一次出現(xiàn)了包涵體，這一次沒(méi)有，我用這一次的粗酶液和提純的蛋白測(cè)試酶活性，結(jié)果一點(diǎn)活性沒(méi)有。請(qǐng)教大佬幫我分析一下可能的原因和解決辦法。
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號(hào)
基因序列沒(méi)問(wèn)題吧，如果是專利里面拷貝的序列，可要擔(dān)心呢
提純蛋白是包涵體純化出來(lái)的還是可溶純化出來(lái)的？
如果是包涵體純化的話，有時(shí)候雖然能純化出來(lái)可以溶解，但是其實(shí)是不正確折疊的沒(méi)有活性，
酵母表達(dá)怎么會(huì)出現(xiàn)包涵體呢？概率極低。
你這個(gè)載體是胞內(nèi)表達(dá)啊，破菌純化的？