首先，可溶不一定是結(jié)構(gòu)正確的單體，也可能是可溶性多聚體，這是很常見的。你的蛋白出現(xiàn)過包涵體，說明蛋白容易聚集，你首先要想辦法搞清楚是什么原因?qū)е碌�。我看了幾種不同的序列，預(yù)測(cè)分析發(fā)現(xiàn)它們的共同特征是本身較穩(wěn)定，熱穩(wěn)定性也比較好，但含有較多的Cys。盡管酵母能輔助二硫鍵形成，但多Cys正確配對(duì)還是有一定困難的（雖然不知道你具體是哪個(gè)序列）。所以，我個(gè)人認(rèn)為聚集可能主要是由于分子內(nèi)以及分子間的二硫鍵錯(cuò)配造成的。建議破菌純化后做還原非還原電泳比較，看一下非還原電泳是否存在大量二聚、三聚等多聚體。如果是這種情況，要么優(yōu)化表達(dá)，要么對(duì)樣品復(fù)性，比如破菌加還原劑，直接還原純化，純化后稀釋蛋白，在較低的濃度下低溫透析緩慢去除還原劑讓其逐漸氧化，也可以添加GSH、GSSG來輔助體外二硫鍵的形成。如果有分子篩，可以把純化的樣品還原處理以后再跑一下柱子（buffer帶鹽），看一下還原以后是否存在多聚體，如果有明顯聚集體，說明存在較明顯的疏水聚集。這時(shí)候就需要用尿素或鹽酸胍對(duì)樣品變性并還原處理，然后再嘗試復(fù)性。
另外，超聲一般建議冰浴超2s停3s，超10s容易導(dǎo)致過熱引發(fā)蛋白變性聚集，功率根據(jù)體積來決定，看一下儀器的說明書，

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