線性化酶的選擇
請問有人做過用pPIC9K表達載體來做GS115酵母表達外源基因?qū)嶒瀱幔烤�性化質(zhì)粒酶切的是sacⅠ位點還是salⅠ位點，有何區(qū)別？線性化之后的純化原理？怎么純化？
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號
兩個都可以。插入位點有差異。關(guān)系不大。線性化后不要純化。因為電轉(zhuǎn)化要比較高的DNA濃度，純化都會造成大量損失。所以最好在線性化之前把質(zhì)粒濃度提高到轉(zhuǎn)化所需濃度(大于1ug/ul,略低關(guān)系不太大)，然后再線性化，線性化后直接電轉(zhuǎn)。
我的經(jīng)驗是，線性化后直接用來做電轉(zhuǎn)，不需要其他處理
，
這布建議大提質(zhì)粒，達到所需濃度。然后線性化后可以乙醇沉淀濃縮一下，效果很好