原核表達(dá)蛋白誘導(dǎo)問題
使用pGEX-4T-1載體表達(dá)蛋白，在未加IPTG與加IPTG誘導(dǎo)組無差異，然后換了pET-28a載體，同樣也出現(xiàn)這種奇怪的現(xiàn)象，已經(jīng)困擾很久了，百思不得其解，望各位大佬指點(diǎn)迷津，小女子不甚感激。
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這個(gè)沒有背景介紹，無法分析
這種情況還是比較少見的，因?yàn)槟阏f的載體還是比較常見的，相比pGEX，pet還是有一些不同的，我想問一下，你采用化轉(zhuǎn)的時(shí)候，轉(zhuǎn)化子是不是非常多？
結(jié)果一樣有兩種情況，第一種是有表達(dá)，第二種是沒表達(dá)。代表的問題是不一樣的。首先要確認(rèn)是否存在表達(dá)。從你的情況我感覺是沒有表達(dá)，質(zhì)粒構(gòu)建正確是第一步，其中你要確認(rèn)讀碼框是正確讀碼的，這很重要。其次要看是否存在稀有密碼子。以上2點(diǎn)要確認(rèn)好。質(zhì)粒構(gòu)建和轉(zhuǎn)化都很容易，但轉(zhuǎn)化子不要特別多，我之前的一個(gè)項(xiàng)目就是這個(gè)問題導(dǎo)致的假陰性
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